KOAGULASE-TEST: BEGRÜNDUNG, VERFAHREN UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Der Koagulasetest ist eine Labortechnik, mit der das Vorhandensein des Enzyms Koagulase nachgewiesen wird. Dieses Enzym hat die Eigenschaft, Plasma zu koagulieren. Loeb war 1903 der erste, der dieses Enzym beschrieb.

Dieser Test wird an grampositiven, Katalase-positiven Kokken durchgeführt, wodurch die Staphylococcus aureus-Stämme vom Rest der Staphylokokken unterschieden werden können, da dies der einzige Mikroorganismus von klinischer Bedeutung ist, der sie produziert.

Beide Bilder zeigen einen positiven Koagulase-Test. Quelle: Bild links: Philippinjl. Bild rechts: Foto des Autors MSc. Marielsa Gil.

In diesem Sinne werden Mitglieder der Familie der Staphylococaceae, die negativ getestet wurden, häufig als Koagulase-negativer Staphylococcus bezeichnet.

Es gibt einige andere Stämme als S. aureus, die Koagulase produzieren können, wie Staphylococcus schleiferi spp. Coagulans, S. hyicus, S. intermedius und S. delphini.

Die ersten drei sind jedoch auf veterinärmedizinischer Ebene von klinischer Bedeutung und konnten sehr selten als Erreger von Infektionen beim Menschen gefunden werden, während S. delphini nur in Meeresumgebungen vorkommt.

Darüber hinaus sind sie leicht zu unterscheiden, da S. hyicus und S. intermedius Mannit nicht fermentieren und S. schleiferi spp. Coagulans Maltose oder Trehalose nicht fermentiert, während S. aureus diese Kohlenhydrate fermentiert.

Das Vorhandensein des Koagulaseenzyms wurde mit der Virulenz der Stämme in Verbindung gebracht. Diese Theorie ist jedoch auseinandergefallen, da andere virulente Koagulase-negative Spezies beobachtet werden, die signifikante Infektionen hervorrufen können.

Basis

Deutung

Agglutination innerhalb von 5-20 Sekunden (stark positiver Test).

Variable Agglutination zwischen 20 Sekunden und einer Minute (verzögerter positiver Test).

Ein gewisser Grad an Agglutination nach einer Minute (zweifelhafte Beweise). Es wird empfohlen, den Test zu wiederholen oder durch die Röhrchenmethode zu bestätigen.

Es erfolgt keine Agglutination (negativer Test).

Ergebnis mit SSF. Es muss immer negativ sein, wenn es automatisch positiv gibt, wird das Testergebnis ungültig.

-Tube Koagulase-Test

Materialien

-Steriles Reagenzglas

-Plasma

-Bad Mariens bei 37 ° C.

Technik

Pipettieren Sie 0,5 ml Plasma mit einer sterilen Pipette in ein 12 x 75-Reagenzglas. Laden Sie die Platinschleife mit 2 bis 4 reinen Kolonien, um sie 18 bis 24 Stunden lang aus einer festen Kultur zu untersuchen, und lösen Sie sie im Plasma auf vorsichtig mischen und 4 Stunden bei 37 ° C inkubieren.

Untersuchen Sie das Röhrchen in der ersten Stunde, ohne es zu schütteln. Kippen Sie es einfach vorsichtig. Wenn ein Gerinnsel immer noch nicht gesehen wird, kann es weiterhin alle 30 Minuten beobachtet werden, bis die 4 Stunden abgeschlossen sind. Wenn es nach 4 Stunden immer noch negativ ist, kann es bis zu 24 Stunden bei Raumtemperatur belassen werden. Beobachten und melden Sie das Ergebnis.

Erfahrungsgemäß empfehlen einige Mikrobiologen die Verwendung von 500 µl einer Bakteriensuspension aus einer 18-Stunden-Kultur in flüssigem Medium, um den Test durchzuführen.

Es scheint schnellere und zuverlässigere Ergebnisse zu liefern als beim Emulgieren von Kolonien aus festen Medien, insbesondere wenn menschliches Plasma aus der Blutbank verwendet wurde.

Die Verwendung von Stämmen aus einer Brühe hilft, das mögliche Vorhandensein von menschlichen Anti-Staphylokokken-Antikörpern im Plasma zu verdünnen, die die Wirkung von Koagulase hemmen können.

Deutung

Wenn ein Gerinnsel gesehen wird, das die gesamte Flüssigkeit (vollständige Gerinnung) oder ein Gerinnsel mit nichts in der verbleibenden Flüssigkeit (teilweise Gerinnung) umfasst, sollte dies als positiver Test betrachtet werden.

Wenn kein Gerinnsel gebildet wird, dh die Suspension homogen bleibt, ist der Test negativ.

-Koagulase-Test mit Fibrinogen

Fibrinogen wird wie Plasma verwendet und sowohl für den Objektträger- als auch für den Röhrchentest verwendet. Gehen Sie wie für Plasma beschrieben vor und interpretieren Sie auf die gleiche Weise.

Verwenden

Es wird verwendet, um Staphylococcus aureus von Koagulase-negativen Staphylokokken zu unterscheiden.

QA

Halten Sie frische Kulturen eines S. aureus-Stammes bereit, um sie als positive Kontrolle zu verwenden. Ein S. epidermidis-Stamm ist auch als Negativkontrolle erhältlich.

Einschränkungen

- Ein positiver Test sollte nicht 24 Stunden lang inkubiert werden, da S. aureus ein Fibrinolysin produziert, das das Gerinnsel auflöst.

- Für einen zuverlässigen Test sollte frisches oder neu rekonstituiertes Plasma verwendet werden. Es ist wichtig, frische Bakterienkulturen zu verwenden (18 bis 24 Stunden). Dies vermeidet falsche Negative.

-Der Test muss zusammen mit einer negativen und einer positiven Kontrolle durchgeführt werden.

-Einige feste Medien können den Koagulasetest stören. Es wird nicht empfohlen, Kolonien aus salzigem Mannitagar zu verwenden.

-Wenn Citratplasma verwendet wird, wird empfohlen, 5 Einheiten Heparin pro ml Plasma zu platzieren, um falsch positive Ergebnisse zu vermeiden. Dies liegt daran, dass einige andere Mikroorganismen als S. aureus Citrat abbauen und die Gerinnung des Plasmas verursachen können. In diesem Fall ist es ratsam, einen Gramm- und einen Katalasetest durchzuführen.

- Im Röhrentest ist es wichtig, die Reaktion alle 30 Minuten zu überwachen, da es Stämme von S. aureus gibt, die hohe Konzentrationen an Fibrinolysin produzieren und das neu gebildete Gerinnsel schnell verdünnen. Vermeiden Sie falsche Negative.

- Wenn Sie den Test überwachen, vermeiden Sie ein plötzliches Schütteln des Röhrchens. Dies kann die Einleitung der Gerinnselbildung zerstören, die später nicht wiederhergestellt wird, was zu falsch negativen Ergebnissen führt.

Verweise

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5. "Koagulase." Wikipedia, die freie Enzyklopädie. 12. Februar 2019, 04:23 UTC. 22. April 2019, 15:50 Uhr wikipedia.org.