MALONATBRÜHE: GRUNDIERUNG, ZUBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Die Malonatbrühe ist das flüssige Kulturmedium, das für den diagnostischen Test (Malonat) verwendet wird, um einige Gattungen der Familie Enterobacteriaceae zu unterscheiden. Es wurde 1933 von Leifson hergestellt und später von Ewing modifiziert, der der ursprünglichen Formel eine kleine Menge Dextrose und Hefeextrakt hinzufügte.

Das Medium besteht derzeit aus Hefeextrakt, Ammoniumsulfat, Dikaliumphosphat, Monokaliumphosphat, Natriumchlorid, Natriummalonat, Dextrose und Bromthymolblau. Dieser Test ist im Allgemeinen in der biochemischen Identifizierungsbatterie für Enterobacteriaceae enthalten und hilft bei der Unterscheidung bestimmter Gattungen und Arten.

Grafische Darstellung des Malonat-Tests. A. Negativer Test, B. (Ansäuerung) Negativer Test, C. (mittlere Alkalisierung) Positiver Test. Quelle: Farbtuben publicdomainpictures.net

Der Malonat-Test basiert hauptsächlich auf der Fähigkeit einiger Mikroorganismen, Natriummalonat als einzige Kohlenstoffquelle und Ammoniumsulfat als Stickstoffquelle zu verwenden.

Der Malonat-Test ist normalerweise bei einigen Arten der Gattungen Enterobacter, Klebsiella und Citrobacter positiv. Während die meisten Arten der Gattungen Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus und Providencia negativ reagieren.

Basis

Der Malonat-Test besteht darin, diejenigen Bakterien zu zeigen, die Natriummalonat als einzige Kohlenstoffquelle und Ammoniumsulfat als Stickstoffquelle verwenden können.

Die meisten Enterobacteriaceae, die kein Malonat verwenden, können in diesem Medium wachsen und nehmen Dextrose und Hefeextrakt als Nährstoffe.

In diesem Fall wird jedem Versuch, durch Verwendung von Peptonen zu alkalisieren, durch die Produktion von Säuren entgegengewirkt, die durch die Fermentation von Dextrose erzeugt werden. Ebenso wirken Dikalium- und Monokaliumphosphate als Puffer und halten den pH-Wert bei 6,7.

Wenn der Test negativ ist, bleibt die Brühe daher in der ursprünglichen Farbe (grün). In seltenen Fällen kann das Medium aufgrund der Fermentation von Dextrose sauer werden. Ohne die Verwendung der Peptonen und des pH-Indikators würde sich die Farbe des Mediums in Richtung Gelb ändern. Dazu muss der pH-Wert auf 6 fallen.

Wenn dieser Test jedoch positiv ist, wird gesagt, dass der Mikroorganismus Malonat und Ammoniumsulfat als Kohlenstoff- bzw. Stickstoffquellen verwendete, ohne die anderen Komponenten zu verwenden.

In diesem Fall wird das Medium aufgrund der Freisetzung von Natrium und der daraus resultierenden Bildung von NaOH alkalisch. In diesem Sinne ändert der pH-Indikator (Bromthymolblau) die Farbe des Mediums von grün nach blau, wenn der pH-Wert gleich oder größer als 7,6 ist. Blau kann hell oder intensiv sein (preußisches Blau).

Schließlich behält Natriumchlorid die Osmolarität des Mediums bei und Wasser ist das Verdünnungsmittel aller Komponenten.

Deutung

Gleiche Farbbrühe (grün) - Negativer Test

Gelbe Brühe: negativer Test

Hell- oder tiefblaue Brühe: Test positiv

Es gibt eine Variante namens Phenylalanin-Malonat-Brühe, auch Shaw- und Clarke-Medium genannt. In diesem Fall können zwei Tests analysiert werden, die Verwendung von Malonat als Kohlenstoffquelle und die Herstellung von Brenztraubensäure aus Phenylalanin.

Vorbereitung

Malonate Brühe

Die Anzahl der Gramm, die in der Beilage des ausgewählten Handelsunternehmens angegeben sind, wird gewogen (sie kann von einem zum anderen variieren). Die gewogenen Gramm werden in einem Liter destilliertem Wasser suspendiert. Leicht erhitzen, bis sich alles vollständig aufgelöst hat. Verteilen Sie 3 ml des Mediums in 13/100 Reagenzgläsern mit Baumwollkappen.

Im Autoklaven 15 bis 20 Minuten bei 121 ° C sterilisieren.

Vor Gebrauch abkühlen lassen. Wenn sie nicht sofort verwendet werden sollen, lagern Sie sie bis zur Verwendung im Kühlschrank. Bringen Sie die Brühen vor dem Inokulieren auf Raumtemperatur.

Der pH-Wert des Mediums sollte 6,7 ± 0,2 betragen. Die Farbe des vorbereiteten Mediums ist flaschengrün.

Phenylalanin-Malonat-Brühe

11 g des dehydrierten Mediums werden abgewogen und in 1 Liter destilliertem Wasser gelöst. Der Rest der Zubereitung ist der gleiche wie zuvor beschrieben.

Es kann auch hergestellt werden, indem 2 g / l Phenylalanin zu dem Malonatbrühenmedium gegeben werden, bevor es sterilisiert wird.

Verwenden

Es wird als Teil der Reihe biochemischer Tests verwendet, die zur Identifizierung von Bakterien der Enterobacteriaceae-Familie zusammengestellt werden.

Hilft bei der Unterscheidung zwischen:

-Die Gattungen Klebsiella und Enterobacter (+) der Gattungen Escherichia und Serratia (-).

-Die Arten Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame und Salmonella enterica ssp diarizonae (+) der Art Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Für die Gattung Klebsiella allgemein (+) aus der Gattung Actinobacillus (-).

- Gelegentlich kann es bei der Differenzierung von Gattungen und Arten von Bakterien helfen, die nicht zur Familie der Enterobacteriaceae gehören, wie z. B. bei den nicht fermentierenden gramnegativen Bazillen Alcaligenes faecalis (+) und Acinetobacter sp (-).

Quelle: Koneman E., Allen S., Janda W., Schreckenberger P., Winn W. (2004). Mikrobiologische Diagnose. 5. Aufl. Editorial Panamericana SA Argentinien.

Prozess

Unter einem Feuerzeug wird ein Teil eines reinen Kölns mit einem ordnungsgemäß sterilisierten und gekühlten Platingriff entnommen. Die entnommene Probe (leichtes Inokulum) wird in der Malonatbrühe gelöst. Inkubieren Sie mit lockerem Deckel in Aerobiose bei 35 ° C ± 0,2 für 24 bis 48 Stunden.

Malonatbrühe kann auch aus einer 18-24-stündigen Kultur in Trypticase-Soja-Brühe inokuliert werden. In diesem Fall werden 0,01 ml mit einer sterilen Pipette entnommen und die Malonatbrühe beimpft. Inkubieren Sie mit lockerem Deckel in Aerobiose bei 35 ° C ± 0,2 für 24 bis 48 Stunden.

Am Ende der Zeit werden die Ergebnisse interpretiert. Jede Spur von blauer Farbe nach 48 Stunden Inkubation sollte als positiv angesehen werden. Der Test sollte erst nach Ablauf der 48-stündigen Inkubationszeit als negativ interpretiert werden.

Bei Verwendung der Phenylalanin-Malonat-Bouillon-Variante wird das Malonat zuerst interpretiert und dann werden 5 Tropfen 1 N HCl und 3-5 Tropfen 8% Eisenchlorid zugegeben. Eine dunkelgrüne Farbe wird als positiver Test für Phenylalanin interpretiert. Wenn andererseits das Medium hellblau wird, ist der Test für Phenylalanin negativ.

QA

Um die Sterilitätskontrolle des Mediums durchzuführen, sollten eine oder zwei Brühen 24 Stunden lang bei 35 ° C ± 0,2 inkubiert werden. Nach dieser Zeit sollte es keine Trübung oder Farbveränderung mehr geben.

Zur Qualitätskontrolle können bekannte oder zertifizierte Stämme verwendet werden, wie z. B.: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 und Escherichia coli ATCC 25922.

Die erwarteten Ergebnisse sind:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae und Salmonella enterica ssp arizonae reagieren positiv (mittelblaue Farbe).
• Für Escherichia coli sollte das Ergebnis negativ sein, dh es wird erwartet, dass es keine Farbänderung (grün) gibt oder dass es aufgrund der Glukosefermentation gelb wird.

Einschränkungen

Verwenden Sie keine Brühe, die Trübung, Niederschläge, Farbveränderungen oder Anzeichen einer Verschlechterung aufweist.

Verweise

1. Pedraza J., Sanandres N., Varela Z., Aguirre E., Camacho J. Mikrobiologische Isolierung von Salmonella spp. und molekulare Werkzeuge für seinen Nachweis. Uninorte Gesundheit. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73 & ndash; 94. Verfügbar unter: scielo.org.co
2. BBL. Malonate Brühe, Ewing modifiziert. 2007. Verfügbar unter: bd.com
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5. Mbiolog Diagnostics. Malonato-Brühe. Verfügbar unter: mbiolog.com
6. Koneman E., Allen S., Janda W., Schreckenberger P., Winn W. (2004). Mikrobiologische Diagnose. 5. Aufl. Editorial Panamericana SA Argentinien.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Phenylalaninmalonatbrühe. Verfügbar unter: condalab.com