Der Mannitolsalzagar oder das Manitolsalz ist eine feste mittelselektive und differenzielle Kultur. Es wurde von Chapman zur Isolierung von pathogenen grampositiven Kokken, insbesondere Staphylococcus aureus, entwickelt.
Es ist jedoch auch nützlich, unter anderem Staphylococus epidermidis, die manchmal als opportunistischer Erreger vorliegen kann, und Staphylococcus saprophyticus, einen anerkannten Harnwegserreger, zu isolieren.
A. Fiola mit hergestelltem salzigem Mannit-Agarmedium. B. Gesalzene Mannit-Agarplatten, die mit fermentierenden und nicht fermentierenden Mannit-Bakterienstämmen ausgesät wurden. Quelle: A und B: Fotos des Autors MSc. Marielsa Gil.
Einige Enterokokken sowie bestimmte grampositive sporenbildende Stäbchen können auf diesem Medium wachsen.
Dieses Medium ist sehr nützlich bei der Analyse klinischer Proben, wird aber auch bei der mikrobiologischen Untersuchung von Lebensmitteln und bei der Qualitätskontrolle von Industrieprodukten wie Kosmetika und Arzneimitteln verwendet.
Salziger Mannit-Agar besteht aus Extrakten und Peptonen aus Rindfleisch, Triptein, Mannit, Natriumchlorid, Phenolrot und Agar.
Basis
Mannitol-Agar ist aufgrund seiner hohen Salzkonzentration selektiv. Der Salzgehalt wirkt hemmend und verhindert das Wachstum von gramnegativen Bakterien.
Es ist auch aufgrund des Vorhandenseins des Kohlenhydratmannits und des Phenolrot-pH-Indikators unterschiedlich. Daraus produzieren die Bakterien, die Mannit fermentieren können, Säuren, säuern das Medium an, färben die Kolonien und das Medium gelb.
Andererseits wachsen Kolonien, die Mannit nicht fermentieren, im Medium und nehmen die Nährstoffe auf, die durch Extrakte und Peptonen von Fleisch und Triptein bereitgestellt werden. Von dort extrahieren die Bakterien den für ihr Wachstum notwendigen Kohlenstoff, Stickstoff, Vitamine und Mineralien.
Die Kolonien können in diesem Fall schwach oder stark rosa sein, und das Medium bleibt gleich gefärbt oder wechselt zu Fuchsie.
Agar ist die Substanz, die dem Medium die Konsistenz verleiht.
Vorbereitung
Zur Herstellung eines Liters Salzmannit-Agar werden 111 g des dehydratisierten Mediums der bevorzugten Handelsfirma gewogen und unter Verwendung eines Kolbens in 1000 ml destilliertem Wasser gelöst.
Unter häufigem Rühren des Mediums wird Wärme angewendet, um den Auflösungsprozess zu verbessern. Eine Minute kochen lassen.
Der Kolben wird 15 Minuten bei 121 ° C in den Autoklaven gestellt.
Nehmen Sie das Fläschchen am Ende der Zeit aus dem Autoklaven, lassen Sie es ruhen und servieren Sie es zwischen 15 und 20 ml auf sterilen Petrischalen, wenn die Temperatur etwa 50 bis 55 ° C beträgt.
Es darf sich verfestigen, in Plaqueros in umgekehrter Reihenfolge bestellen und bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahren. Warten Sie vor dem Aussäen einer Probe, bis die Platte Raumtemperatur erreicht hat.
Die Platten werden durch Streifenbildung oder durch Oberflächenaussaat mit einem Drigalski-Spatel ausgesät. Der endgültige pH-Wert des hergestellten Mediums muss 7,4 ± 0,2 betragen
Die Farbe des dehydrierten Mediums ist hellbeige und die Farbe des hergestellten Mediums ist orangerot.
Anwendungen
Aufgrund seiner hohen Selektivität ist dieses Medium ideal für die Aussaat von Proben mit gemischter Flora, bei denen das Vorhandensein von Staphylococus aureus als Hauptpathogen dieser Gattung gesucht wird.
In diesem Sinne ist eine der häufigsten Anwendungen die mikrobiologische Analyse von Rachenexsudaten und Nasenausflussproben, insbesondere zum Nachweis von asymptomatischen S. aureus-Trägern.
Einige Länder haben diese Analyse als obligatorische Anforderung für Personen implementiert, die als Lebensmittelverkäufer arbeiten möchten.
Diese Kontrolle verhindert, dass Personen, die Träger von S. aureus sind, eingestellt werden, wodurch eine massive Lebensmittelvergiftung aufgrund des Verzehrs von mit Staphylokokken-Enterotoxin kontaminierten Lebensmitteln vermieden wird.
Es kann unter anderem auch in die Aussaat von Wundinfektionen, Blutkulturen, Liquor und bronchoalveolarer Lavage einbezogen werden.
Gesalzener Mannit-Agar ist nützlich, um Kolonien aus Urinkulturen von CLED-Agar oder Blutagar, dessen Gram grampositive Kokkencluster enthüllt hat, erneut zu isolieren.
Es gilt unter anderem auch für die mikrobiologische Analyse von Lebensmitteln, Trinkwasser und Böden.
QA
Sobald eine Charge von Platten mit salzigem Mannitagar hergestellt wurde, ist es ratsam, eine Qualitätskontrolle durchzuführen. Kontrollstämme werden ausgesät, um zu zeigen, ob es Wachstum gibt oder nicht.
Bekannte Staphylococcus aureus-Stämme können als positive Kontrolle verwendet werden. Es sollte zufriedenstellend wachsen und gelbe Kolonien entwickeln, und das Medium nimmt auch die gleiche Farbe an.
Ebenso ist es zweckmäßig, einen bekannten Stamm von Staphylococcus epidermidis einzuschließen. Es sollte zufriedenstellend wachsen und rosa Kolonien entwickeln, und das Medium behält die gleiche Farbe oder verdunkelt sich zu einem stärkeren Rosa.
Als negative Kontrolle werden Stämme verwendet, die auf diesem Medium nicht wachsen sollten. Beispielsweise kann ein bekannter Stamm von Escherichia coli oder Klebsiella pneumoniae gezüchtet werden. Das erwartete Ergebnis ist eine vollständige Hemmung, dh kein Wachstum.
Zusätzlich muss eine nicht inokulierte Platte inkubiert werden. Darin sollte es kein Wachstum oder Farbveränderung geben.
Es ist wichtig, dass die Platte nicht verwendet wird, wenn Anzeichen einer Verschlechterung vorliegen, wie z. B. Kontamination, Dehydration, Verfärbung usw.
Abschließende Gedanken
Bei der Verwendung von salzigem Mannit-Agarmedium sind einige wichtige Aspekte zu berücksichtigen:
- Ein Wachstum von gelben Kolonien bedeutet nicht, dass es sich um Staphylococcus aureus handelt. Es sei daran erinnert, dass einige Enterococcus-Stämme in diesem Medium wachsen und Mannit fermentieren können, sowie bestimmte sporenbildende grampositive Stäbchen.
Daher ist es wichtig, ein Gramm an der Kolonie und einen Katalasetest durchzuführen.
Andererseits muss berücksichtigt werden, dass andere Staphylococcus-Arten als Aureus ebenfalls in der Lage sind, Mannit zu fermentieren. Daher ist es wichtig, die Kolonie in eine Nährbrühe zu subkultivieren, um sie von dort zu entnehmen und den Koagulasetest durchzuführen.
Zu den Staphylococcus-Arten von klinischer Bedeutung für den Menschen, die Mannit fermentieren, gehören unter anderem: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum.
Andere können eine variable Reaktion geben, dh manchmal positiv und manchmal negativ. Einige sind unter anderem S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius.
-Es wird nicht empfohlen, Kolonien direkt vom Mannitol-Agar zu entnehmen, um den Koagulase-Test durchzuführen, da die hohe Salzkonzentration im Medium das Ergebnis beeinträchtigen kann.
- Schließlich wird empfohlen, die mit salzigem Mannit besiedelten Platten bis zu 48 Stunden lang zu inkubieren, da einige S. aureus-Stämme Mannit langsam fermentieren können, obwohl dies nicht sehr häufig ist.
Verweise
- Britannia Laboratories. Salziger Mannit-Agar. 2015. Verfügbar unter: britanialab.com
- "Salziger Mannitagar". Wikipedia, die freie Enzyklopädie. 31. Oktober 2018, 19:08 UTC. 17. Januar 2019, 20:55 Uhr, verfügbar unter: es.wikipedia.org.
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- Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiologische Diagnose. 12 ed. Argentinien. Editorial Panamericana SA
- BD Laboratories. BD Mannitol Salzagar. 2013. Verfügbar unter: bd.com.