PEPTONWASSER: BEGRÜNDUNG, VORBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Das Peptonwasser ist ein nicht selektives flüssiges Anreicherungsmedium, das hauptsächlich als Verdünnungsmittel für Lebensmittelproben oder andere Materialien verwendet wird. Dieses Medium ist aus chemischer Sicht sehr einfach, es enthält Fleischpepton, Natriumchlorid und Wasser.

Es hat einen bestimmten Nährwert, wodurch die Probe angereichert werden kann. Wenn Bakterien missbraucht werden, kann dieses Medium die Lebensfähigkeit reparieren. Es ist besonders nützlich bei der Gewinnung von Bakterien, die zur Familie der Enterobacteriaceae gehören.

Peptonwasser in Flaschen. Quelle: MSc. Marielsa Gil

Im Falle der Gewinnung von Salmonellen wird die Verwendung der Buffet-Pepton-Wasser-Variante empfohlen; Dies dient als Voranreicherungsmedium für die Probe, in diesem Fall enthält es andere Elemente wie Dinatriumphosphat und Dikaliumphosphat.

Normalerweise wird Peptonwasser bei neutralem pH-Wert hergestellt. Es gibt jedoch auch andere Varianten, bei denen der pH-Wert 8,5 ± 0,2 (alkalisch) betragen muss, da die zu isolierenden Bakterien alkaliphil sind, wie z Vibrio cholerae.

Darüber hinaus kann dieses Medium als Basismedium für Kohlenhydratfermentationstests verwendet werden.

Basis

Peptonen liefern die für das Bakterienwachstum erforderlichen Nährstoffe, insbesondere Stickstoff und kurzkettige Aminosäuren, während Natriumchlorid das osmotische Gleichgewicht aufrechterhält.

Darüber hinaus ermöglicht das Medium die Dispergierung, Homogenisierung und Reparatur von Bakterienzellen, die durch industrielle Prozesse beschädigt wurden.

Als Verdünnungsmittel ist es ideal, um physiologische Lösung (SSF) oder Phosphatpufferlösung (PBS) effektiv zu ersetzen.

Das Bakterienwachstum wird durch Beobachtung seiner Trübung deutlich.

Vorbereitung

Hausgemachte Zubereitung (nicht kommerziell)

1 g Pepton und 8,5 g Natriumchlorid werden abgewogen und in 1 Liter destilliertem Wasser gelöst. Der pH sollte auf 7,0 eingestellt werden. Hierzu kann 1 N Natriumchlorid verwendet werden.

Herstellung mit handelsüblichem Medium

15 g des dehydrierten Mediums werden gewogen und in einem Liter destilliertem Wasser gelöst. Homogenisieren Sie die Mischung. Falls erforderlich, wird die Mischung 1 Minute lang gekocht, um die vollständige Auflösung zu unterstützen. Bei Bedarf in 100-ml-Flaschen oder 10-ml-Röhrchen servieren. 15 Minuten bei 121 ° C autoklavieren.

Kühlen Sie ab und verwenden Sie oder lagern Sie im Kühlschrank. Der endgültige pH-Wert des Mediums beträgt 7,2 ± 0,2.

Die Farbe des dehydrierten Mediums ist hellbeige und das vorbereitete Medium ist hell bernsteinfarben.

Vorbereitung für Fermentationstests

Zu der vorherigen Zubereitung - vor dem Sterilisieren - muss das Kohlenhydrat bis zu einer Endkonzentration von 1% zuzüglich des Andrade-Indikators (saures Fuchsin) oder Phenolrot (0,018 g / l) zugesetzt werden. Die Röhren sollten mit einer Durham-Glocke ausgestattet sein, um die Gasbildung zu beobachten.

Andere Varianten von Peptonwasser

Gepuffertes oder gepuffertes Peptonwasser

Es enthält enzymatisches Hydrolysat von Kasein, Natriumchlorid, Dihydrogen Kaliumphosphat und Natriumhydrogenphosphat-Dodecahydrat. Der endgültige pH-Wert beträgt 7,0 ± 0,2.

Zur Herstellung 20 g des dehydrierten Mediums wiegen und in 1 Liter destilliertem Wasser lösen. Etwa 5 Minuten ruhen lassen. 1 Minute erhitzen, bis sich alles vollständig aufgelöst hat.

Nach Bedarf in geeignete Gläser füllen. Mit dem Autoklaven 15 Minuten bei 121 ° C sterilisieren.

-Alkalisches Peptonwasser

25 g des dehydrierten Mediums werden gewogen und in 1 Liter Wasser gelöst. Verfahren Sie wie oben beschrieben. Der pH-Wert liegt zwischen 8,3 und 8,7.

Verwenden

Das Inokulum erfolgt durch direktes Platzieren der Probe.

Es wird zum Verdünnen von Proben verwendet, insbesondere wenn der Verdacht besteht, dass Bakterien beschädigt sind. Normalerweise betragen die Verdünnungen 1:10 und 1: 100.

24 Stunden in Aerobiose bei 35-37 ° C inkubieren.

Stuhlproben

Für Stuhlproben für Salmonellen wird die Verwendung von gepuffertem oder gepuffertem Wasser als Voranreicherungsmedium empfohlen.

Gehen Sie dazu wie folgt vor:

Wenn sich der Stuhl gebildet hat, nehmen Sie 1 g Probe. Wenn sie flüssig sind, nehmen Sie 1 ml Stuhl und suspendieren Sie sie in einem Röhrchen mit 10 ml Buffet-Peptonwasser. Bei Rektaltupfern das im Tupfer enthaltene Material mit gepuffertem Peptonwasser in das Röhrchen entladen.

Mischen und homogenisieren Sie die Probe in jedem Fall sehr gut.

18 bis 24 Stunden bei 37 ° C inkubieren. Anschließend Subkultur in einer Anreicherungsbrühe wie Selenit-Cystin-Brühe oder Tetrathionat-Brühe bei 37 ° C für weitere 18-24 Stunden. Schließlich in selektiven Medien für Salmonellen wie SS-Agar, XLD-Agar, Hektoen-Agar ua kultivieren.

Lebensmittelproben

Peptonwasser wird als Anreicherungsmedium oder als einfaches Verdünnungsmittel verwendet. Wenn jedoch nach Salmonellenarten gesucht wird, wird es, wie bereits beschrieben, als Voranreicherungsmedium verwendet.

Gehen Sie beim Essen wie folgt vor:

Für feste Lebensmittel wiegen Sie 25 g der Probe und für flüssige Lebensmittel messen Sie 25 ml davon. Geben Sie die Portion in Kolben mit 225 ml Peptonwasser. Die Probe mischen und homogenisieren.

Wenn der Verdacht besteht, dass die mikrobielle Belastung hoch ist, können serielle oder dezimale Verdünnungen vorgenommen werden, um das Zählen der koloniebildenden Einheiten (KBE) zu erleichtern.

Die Anzahl der Verdünnungen hängt von der Art der Probe und der Erfahrung des Analytikers ab.

Wenn im Gegenteil vermutet wird, dass die mikrobielle Belastung sehr gering ist, ist es nicht erforderlich, Verdünnungen durchzuführen. Anschließend Subkultur auf selektiven Medien.

Bei Meeresnahrungsmitteln wie Schalentieren, Fischen usw., die auf der Suche nach Vibrio cholerae oder anderen Vibrio-Arten sind, sollte Peptonwasser mit einem pH-Wert von 8,5 (alkalisches Peptonwasser) verwendet werden.

QA

Von jeder hergestellten Charge sollten ein bis zwei Röhrchen ohne Inokulation 24 Stunden lang in Aerobiose bei 37 ° C inkubiert werden. Am Ende der Zeit sollte keine Trübung oder Farbänderung beobachtet werden.

Bekannte Kontrollstämme können auch verwendet werden, um ihre Wirksamkeit zu bewerten:

Hierzu können folgende Bakterienstämme verwendet werden: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

In allen Fällen wird eine zufriedenstellende mikrobielle Entwicklung erwartet, die durch Trübung des Mediums beobachtet wird.

Einschränkungen

-Das dehydrierte Medium ist sehr hygroskopisch und muss daher vor Feuchtigkeit geschützt werden.

-Das Medium sollte nicht verwendet werden, wenn eine Verschlechterung beobachtet wird.

-Das dehydrierte Kulturmedium sollte zwischen 10 - 35 ° C gelagert werden

-Das vorbereitete Medium muss gekühlt aufbewahrt werden (2-8 ° C).

Verweise

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