AGAR FRAU: GRÜNDUNG, VORBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Die Agar-MRS ist eine selektive Kultur mit festem Medium, die zur Isolierung und Zählung von Milchsäurebakterien, insbesondere der Gattung Lactobacillus, verwendet wird. Dieser Agar wurde 1960 von Man, Rogosa und Sharpe mit dem gleichen Namen hergestellt, aber aufgrund seiner Komplexität wird häufig die Abkürzung MRS verwendet.

Es besteht aus Proteosepepton, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Glucose, Sorbitanmonoleat, Dikaliumphosphat, Natriumacetat, Ammoniumcitrat, Magnesiumsulfat, Mangansulfat und Agar.

Man Rogosa und Sharpe Agar (MRS) mit Lactobacillus sp. Quelle: Für diesen Artikel gespendetes Foto der Autoren: Báez E., González G., Hernández G., López E., Mega M. Foto während der Untersuchung mit dem Titel: Bewertung von Milchsäurebakterien und Bifidobakterien mit probiotischem Potenzial in Muttermilch und Säuglingsstühlen .

Diese Zusammensetzung ermöglicht die ordnungsgemäße Entwicklung von Milchsäurebakterien aus klinischen Proben wie Kot, Vaginalausfluss, oralen Proben und Muttermilch sowie Milch- und Fleischnahrungsmitteln.

Es wird nicht routinemäßig in klinischen Labors eingesetzt, da Milchsäurebakterien selten an Krankheitsprozessen beteiligt sind. Im Bereich der Lebensmittelmikrobiologie wird MRS-Agar jedoch häufiger eingesetzt.

Andererseits wird dieses Medium von einigen Forschungszentren verwendet, deren Ziel die Untersuchung von Milchsäurebakterien ist.

Basis

Man-, Rogosa- und Sharpe-Agar haben eine ziemlich komplexe Zusammensetzung. Indem die Funktion jeder ihrer Komponenten aufgeschlüsselt wird, kann ihre Grundlage erklärt werden.

Proteose-Pepton, Fleischextrakt, Hefeextrakt und Glukose sind Nährstoffe, die die Quelle für Kohlenstoff, Stickstoff, Vitamine und Mineralien darstellen, die für das Bakterienwachstum erforderlich sind. Darüber hinaus ist Glukose die universelle Energiequelle, die in den meisten Kulturmedien verwendet wird.

Andererseits ist zur Förderung des Wachstums von Milchsäurebakterien das Vorhandensein von Cofaktoren (Kationen) erforderlich, die für den Metabolismus von Lactobacillus und verwandten Bakterien wesentlich sind; Diese Verbindungen sind die Natrium-, Magnesium- und Mangansalze.

Ebenso sind Sorbitanmonoleat oder Polysorbat 80 eine wichtige Quelle für Fettsäuren, da sie als Nährstoffe absorbiert werden.

Darüber hinaus wirken Sorbitanmonoleat und Ammoniumcitrat, indem sie die Entwicklung der begleitenden Flora, insbesondere der gramnegativen Bakterien, hemmen und den selektiven Charakter dieses Agars verleihen.

Schließlich ist der Agar-Agar derjenige, der dem Medium die feste Konsistenz verleiht.

Es gibt andere Varianten von Man Rogosa Sharpe Agar; Einer von ihnen ist mit Cystein (MRSc) ergänzt, das unter anderem für die Isolierung von Bifidobakterien sehr nützlich ist. Andererseits gibt es das MRS-Medium, das mit Neomycin, Paromomycin, Nalidixinsäure und Lithiumchlorid ergänzt ist und speziell für die selektive Zählung von Bifidobakterien in Milchprodukten bestimmt ist.

Vorbereitung

68,25 g des dehydrierten Mediums werden abgewogen und in einem Liter destilliertem Wasser gelöst. 5 Minuten stehen lassen. Um sich vollständig aufzulösen, wenden Sie sich unter häufigem Rühren an eine Wärmequelle und kochen Sie 1 bis 2 Minuten lang. In einem Autoklaven 15 Minuten bei 121 ° C sterilisieren.

Wenn Sie den Autoklaven verlassen, einige Minuten stehen lassen und noch heiß in sterilen Petrischalen verteilen.

Lassen Sie die Platten erstarren und umdrehen, bestellen Sie sie in Plattengestellen und kühlen Sie sie bis zur Verwendung. Lassen Sie die Platten vor Gebrauch auf Raumtemperatur erwärmen.

Der pH-Wert des Mediums sollte 6,4 ± 0,2 betragen. Einige Handelshäuser empfehlen einen pH-Wert zwischen 5,5 und 5,9.

Das dehydrierte Medium hat eine beige Farbe und ist aus dunklem Bernstein hergestellt.

Sowohl das dehydratisierte Medium als auch die vorbereiteten Platten sollten bei 2-8 ° C gelagert werden.

Anwendungen

MRS-Agarplatten können an der Oberfläche ausgesät werden (Erschöpfung oder Drigalski-Spatel). Es kann auch nach Tiefe gesät werden. Die Platten sollten 24 bis 72 Stunden bei 37 ° C in Mikroaerophilie (4% O ₂ und 5-10% CO ₂ ) inkubiert werden.

Die Aussaatmethode richtet sich nach dem verfolgten Zweck (Isolierung oder Zählung).

Eigenschaften der Kolonien

Die mutmaßlichen Kolonien von Lactobacillus werden weißlich und haben auf diesem Agar ein schleimiges oder cremiges Aussehen. Sie müssen anschließend identifiziert werden.

Isolierung von Milchsäurebakterien

Hierzu wird Surface Seeding verwendet. Die zu säenden Proben erfordern ein vorheriges Verfahren.

Bei Muttermilchproben wird empfohlen, 1 ml der Probe 10 Minuten bei 14.000 U / min zu zentrifugieren, um die Fettschicht zu entfernen. 900 µl werden verworfen, und in den verbleibenden 100 µl wird das Sediment suspendiert und auf die Oberfläche des MRS-Agars gegossen. Anschließend sollte es mit einem Drigalski-Spatel gleichmäßig verteilt werden.

Bei Stuhlproben wird ein (1) Gramm Stuhl gewogen und in 9 ml 0,1% igem sterilem Peptonwasser homogenisiert, was einer Verdünnung von 1/10 entspricht. Dann werden Reihenverdünnungen durchgeführt, bis eine Endverdünnung von 10 ^{& supmin; & sup4; erhalten wird} .

Schließlich werden 100 ul der 10 & ^supmin ; ^² , 10 & ^supmin ; ^³ und 10 & ^supmin ; & ^sup4; Verdünnungen entnommen und jede Verdünnung wird auf MRS-Agar ausgesät, wobei sie gleichmäßig mit einem Drigalski-Spatel verteilt wird.

Milchsäurebakterien zählen

In diesem Fall erfolgt die Aussaat nach Tiefe.

Für Muttermilchproben wird 1 ml entnommen und in ein steriles konisches Kunststoffröhrchen gegeben. MRS-Agar wird bei einer ungefähren Temperatur von 40 ° C bis zu einem Endvolumen von 25 ml zugegeben, wobei eine homogene Mischung erhalten wird. Anschließend wird es gleichmäßig in sterile Petrischalen gegossen und bis zur Polymerisation stehengelassen.

Für Stuhlproben werden Verdünnungen wie zuvor beschrieben durchgeführt. Nehmen Sie 1 ml jeder Verdünnung und geben Sie sie in sterile konische Kunststoffröhrchen. Geschmolzener MRS-Agar wird bis zu einem Volumen von 25 ml zugegeben.

Die Mischung jeder Verdünnung wird gleichmäßig in sterile Petrischalen gegossen. Schließlich wird es bis zur Polymerisation ruhen gelassen.

Die Kolonie zählt auf Agar von Man Rogosa und Sharpe (MRS). Quelle: Foto für diesen Artikel gespendet. Autoren: Báez E., González G., Hernández G., López E., Mega M. Foto während der Forschung mit dem Titel: Bewertung von Milchsäurebakterien und Bifidobakterien mit probiotischem Potenzial in Muttermilch und Säuglingskot.

Forschungsniveau

Mit jedem Tag gewinnt das Studium von Milchsäurebakterien an Interesse; Die Forscher möchten unter anderem neue Stämme und ihr Potenzial als Starterfermente für die Standardisierung bei der Herstellung von Milchprodukten kennenlernen.

In diesem Sinne haben Alvarado et al. (2007) verwendeten MRS-Agar, um eine Studie durchzuführen, in der sie Milchsäurebakterien isolierten, identifizierten und charakterisierten, die in einem handwerklich geräucherten venezolanischen Andenkäse vorhanden waren.

Im Käse fanden sie das Vorhandensein von Bakterien der Gattungen Lactococcus und Lactobacillus und kamen zu dem Schluss, dass die Mischungen isolierter Stämme als Starterstämme bei der Herstellung von Käse aus pasteurisierter Milch geeignet sind.

Auf der anderen Seite haben Sánchez et al. (2017) verwendeten MRS-Agar, um das Vorhandensein von Milchsäurebakterien im Verdauungstrakt von Ferkeln zu untersuchen, um sie als native Probiotika zu verwenden, die die Produktivität gesunder Ferkel steigern.

Mit diesem Medium gelang es ihnen, vier Arten zu isolieren: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae und Pediococcus pentosaceus.

Ebenso haben Báez et al. (2019) verwendeten MRS-Agar, um Milchsäurebakterien (LAB) und Bifidobakterien mit probiotischem Potenzial in Muttermilch und Säuglingskot zu bewerten.

Es gelang ihnen, 11 BAL und 3 Bifidobacteria sp in der Muttermilch und 8 BAL und 2 Bifidobacteria sp. im Kot. Alle erfüllten bestimmte Parameter, die sie als Bakterien mit probiotischer Aktivität beweisen.

Die Autoren kamen zu dem Schluss, dass sowohl Muttermilch als auch Kot von ausschließlich gestillten Säuglingen als natürliche Quellen für probiotische Bakterien dienen.

QA

Um die Qualität von MRS-Agar zu bewerten, kontrollieren Sie Stämme wie:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli und Bacillus cerei.

Die erwarteten Ergebnisse sind ein zufriedenstellendes Wachstum für die ersten 6 Bakterien, während E. coli und Bacillus cereus vollständig gehemmt werden müssen.

Verweise

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Isolierung, Identifizierung und Charakterisierung von Milchsäurebakterien aus einem venezolanisch geräucherten Anden-Kunstkäse. Seine Verwendung als Starterkultur. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301 & ndash; 308. Verfügbar unter: scielo.org.
2. Sánchez H., Fabián F., Ochoa G., Alfaro-Isolierung von Milchsäurebakterien aus dem Verdauungstrakt des Ferkels. Rev. Investiga. Tierarzt. Peru 2017; 28 (3): 730 & ndash; 736. Verfügbar unter: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Bewertung von Milchsäurebakterien und Bifidobakterien mit probiotischem Potenzial in Muttermilch und Kot von Säuglingen in der Gemeinde Acevedo, Miranda 2017. Bachelorarbeit zur Qualifikation für den Bachelor in Bioanalyse. Universität von Carabobo, Venezuela.
4. Britannia Laboratory. MRS-Agar. 2015. Verfügbar unter: britanialab.com
5. Wikipedia-Mitwirkende. MRS-Agar. Wikipedia, die freie Enzyklopädie. 10. Januar 2018, 19:44 UTC. Verfügbar unter: wikipedia.org Zugriff am 17. Februar 2019.
6. Roy D. Medien zur Isolierung und Zählung von Bifidobakterien in Milchprodukten. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167 & ndash; 82.