BHI-AGAR: GRUNDIERUNG, VORBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Das BHI-Agar- oder Brain Heart Infusion-Agarmedium ist eine nahrhafte feste Kultur. Auf Spanisch bezeichnen wir es als Gehirn-Herz-Infusionsagar. Es ist ein nicht selektives Kulturmedium, was bedeutet, dass sich alle Arten von grampositiven und gramnegativen Bakterien sowie einige Hefe- und Fadenpilze entwickeln können.

Es besteht aus einer Infusion von Gehirn und Herz von Rindfleisch, peptischem Hydrolysat aus tierischen Geweben, Pankreashydrolysat von Kasein, Natriumchlorid, Glucose, Dinatriumphosphat und Agar.

BHI-Platten. Quelle: Foto des Autors MSc. Marielsa Gil.

Es ist zu beachten, dass BHI-Agar eines der am häufigsten verwendeten Kulturmedien in bakteriologischen Labors ist. Es kann ohne Ergänzungsmittel als Primärkultur, Subkultur von Kolonien, die auf anderen selektiven Medien erhalten wurden, oder zur Aufrechterhaltung von Stämmen im Labor verwendet werden.

Andererseits ist es ein ideales Medium, um als Basis für die Herstellung angereicherter Medien wie Blutagar und Schokoladenagar verwendet zu werden. Beide sind ideal für die Isolierung anspruchsvoller Mikroorganismen aus ernährungsphysiologischer Sicht. Es sollte jedoch beachtet werden, dass es, da es Glucose enthält, nicht zur Beobachtung von Hämolysemustern geeignet ist.

Ebenso kann BHI-Agar zur Herstellung spezieller Medien zur Isolierung schwer zu züchtender pathogener Mikroorganismen in gängigen Medien verwendet werden, darunter Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae und Histoplasma capsulatum.

Mit dem Antibiotikum wird BHI-Agar zu einem selektiven Medium für die Isolierung von Pilzen.

Basis

Es ist ein nahrhaftes Kulturmedium zur Isolierung mäßig anspruchsvoller Mikroorganismen, und seine Anreicherung kann durch Zugabe von Blut und anderen Nahrungsergänzungsmitteln erhöht werden.

Es ist ein nicht selektives Kulturmedium und ermöglicht daher das Wachstum der meisten grampositiven und gramnegativen Bakterien sowie einiger Pilze. Es kann jedoch durch Zugabe von Antibiotika selektiv gemacht werden.

Das Medium enthält die Infusion von Gehirn und Herz von Kälbern, das peptische Hydrolysat von tierischen Geweben und das Pankreashydrolysat von Kasein; Alle diese Verbindungen wirken als Quellen für Vitamine, Aminosäuren, Stickstoff und Kohlenstoff.

Glukose ist ein Kohlenhydrat, das Mikroorganismen nach ihrer Fermentation mit Energie versorgt. Währenddessen halten Natriumchlorid und Dinatriumphosphat das osmotische Gleichgewicht aufrecht und liefern einen pH-Wert nahe der Neutralität. Schließlich ergibt der Agar die mittlere feste Konsistenz.

Vorbereitung

52 g des dehydrierten Mediums werden gewogen und in einem Liter destilliertem Wasser gelöst. Bringen Sie die Mischung bis zum Kochen zu einer Wärmequelle und rühren Sie sie während des Auflösungsprozesses häufig um.

BHI-Agarplatten oder -keile können ohne Zusatzstoffe hergestellt werden.

Keile

Für die Herstellung von Keilen die Zubereitung servieren, bis die Hälfte jedes Röhrchens gefüllt ist, abdecken und in einem Autoklaven bei 121 ° C 15 Minuten lang sterilisieren. Beim Verlassen auf einen Boden legen, bis sie sich verfestigen. Später bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahren.

BHI-Keile für Bakterioteca. Quelle: Foto des Autors MSc. Marielsa Gil.

Platten

Die gelöste Mischung wird 15 Minuten bei 121 ° C autoklaviert, auf 50 ° C abkühlen gelassen und 20 ml des Mediums werden in sterilen Petrischalen serviert. Sie dürfen sich verfestigen, werden umgedreht und bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahrt. Lassen Sie die Platten vor dem Säen auf Raumtemperatur kommen.

Der pH-Wert des Mediums muss bei 7,4 ± 0,2 bleiben.

Das Rohmedium hat eine beige Farbe und das vorbereitete Medium eine hell bernsteinfarbene Farbe.

Herstellung von Blutagar

Nach dem Sterilisieren des Mediums auf eine Temperatur von ungefähr 45 bis 50 ° C abkühlen lassen, dann das Blut (50 ml) hinzufügen, vorsichtig zum Homogenisieren mischen und 20 ml in jeder Petrischale aseptisch servieren. Wenn sich Blasen auf der Platte bilden, sollte die leichtere Flamme schnell über die Blasen geleitet werden, um sie zu beseitigen.

Ebenso können spezielle Medien hergestellt werden, indem die entsprechenden Additive zugesetzt werden, wenn die Mischung eine Temperatur von 45 bis 50 ° C erreicht.

Das Medium bleibt kirschrot.

Anwendungen

Verwenden Sie ohne Ergänzungen

BHI-Agar ohne Zusatzstoffe eignet sich als Primärkultur und zur Aussaat von reinen Stämmen von Mikroorganismen mit geringem oder mittlerem Anspruch zur anschließenden Identifizierung.

Da es sich um ein helles Medium handelt, eignet es sich ideal zur Beobachtung von Pigmenten. Da es keine störenden Substanzen enthält, können einige biochemische Tests wie Oxidase und Katalase daran durchgeführt oder andere biochemische Tests aus Kolonien durchgeführt werden Agar.

Ebenso werden BHI-Agarkeile häufig zur Aufrechterhaltung von Stämmen für eine bestimmte Zeit im Labor (Bacterioteca) verwendet.

Platten oder Keile, die mit Bakterienstämmen auf der Oberfläche ausgesät wurden, werden 24 bis 48 Stunden bei 37 ° C inkubiert. Währenddessen hängen bei Pilzen die Temperatur und die Inkubationszeit von der Art des Pilzes ab, der gesucht wird.

Als Basisagar zur Herstellung anderer Medien

Auf dieser Basis können angereicherte und selektive Medien hergestellt werden.

Angereichert

Seine Hauptfunktion besteht darin, als Grundlage für die Herstellung von Blutagar für den routinemäßigen Einsatz in mikrobiologischen Labors zu dienen. Insbesondere die BHI-Base fördert die Isolierung von Streptococcus sp. Es hat jedoch den Nachteil, dass es nicht zur Beobachtung von Hämolysemustern geeignet ist, da es Glucose enthält.

Es wird auch zur Herstellung von Kaninchen- oder Pferdeblutagar zur Isolierung von Haemophilus sp. Für beste Ergebnisse kann eine Anreicherungsergänzung (IsoVitaleX) hinzugefügt werden.

Wenn die Proben aus den Atemwegen stammen, kann dem Agar Bacitracin zugesetzt werden, um die begleitende Flora zu hemmen und die Wahrscheinlichkeit einer Erholung des Haemophilus sp. Zu erhöhen.

Alternativ kann Blutagar (Lamm oder Mensch) mit Cystin-Tellurit hergestellt werden, um Corynebacterium diphtheriae zu isolieren. Ebenso ist es nützlich, Kaninchenblutagar unter Zusatz von Cystin und Glucose zur Isolierung von Francisella tularensis herzustellen.

Die Aussaat der Blutagarplatten erfolgt durch Erschöpfung und sie werden 24-48 Stunden bei 35-37 ° C in Mikroaerophilie (5-10% CO ₂ ) inkubiert .

Selektiv

Dieses Medium mit dem Zusatz von Antibiotika kann Sabouraud-Agar für die Isolierung von Pilzen ersetzen.

Die Kombination von BHI-Agar mit Chloramphenicol - Gentamicin oder Penicillin -, Streptomycin und Pferdeblut ist ideal für die Isolierung von Histoplasma capsulatum.

Je nach zu isolierendem Mikroorganismus wird eine Inkubation bei 35-37 ° C oder bei Raumtemperatur bei Aerobiose empfohlen. Manchmal ist eine Inkubation in beiden Temperaturbereichen erforderlich, wobei 2 Platten verwendet werden.

Einige Pilze wie Trichophyton mentagrophytes müssen bis zu 7 Tage bei Raumtemperatur inkubiert werden.

QA

Von jeder hergestellten Charge wird empfohlen, 1 Platte oder Keil 24 Stunden bei 37 ° C zu inkubieren und sicherzustellen, dass kein Wachstum vorliegt. Dies ist besonders wichtig bei der Herstellung von Blutagar, da es sich um ein leicht kontaminierbares Medium handelt.

Andererseits kann die Qualität des Mediums bewertet werden, indem bekannte oder zertifizierte Standardstämme geimpft und ihre Entwicklung beobachtet werden.

In diesem Sinne können zur Bewertung von BHI-Agar ohne Zusatzstoffe Stämme von Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 oder Candida albicans ATCC 10231 verwendet werden. Sie werden 24 bis 48 Stunden bei 37 ° C in Aerobiose inkubiert. In allen Fällen wird ein zufriedenstellendes Wachstum erwartet.

Stämme von Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 oder Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 können ausgesät werden, um Blutagarplatten zu bewerten.

Bakterienstämme werden 24 Stunden bei 37 ° C in Mikroaerophilie inkubiert, während der Pilz bei Raumtemperatur in einer feuchten Kammer bis zu 7 Tage inkubiert wird. In allen Fällen wird ein zufriedenstellendes Wachstum erwartet.

Verweise

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