Rose Bengal ist ein Labortest, der auf einer Antigen-Antikörper-Reaktion zur Diagnose von Brucellose basiert. Die Technik ermöglicht den Nachweis spezifischer Antikörper gegen das Brucella abortus-Bakterium in menschlichen Serumproben. Das Ergebnis kann qualitativ oder semi-quantitativ angegeben werden.
Die qualitative Form drückt aus, ob der Patient für den Test positiv oder negativ ist, dh ob es Antikörper gibt oder nicht. In der Zwischenzeit wird der semi-quantitative Bericht in IE / ml angegeben und gibt die ungefähre Menge der vorhandenen Antikörper an. Es ist zu beachten, dass Antikörper nur dann produziert werden, wenn der Patient mit dem Mikroorganismus in Kontakt gekommen ist.
Rose Bengal Reaktion in einer Agglutinationsplatte. Quelle: Aus dem Video https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
Aufgrund seiner großen Einfachheit, hohen Empfindlichkeit und Spezifität ist es eine der in der Medizin am häufigsten verwendeten Seroagglutinationstechniken als erster Test für die Diagnose dieser Krankheit.
Einige Forscher haben die Wirksamkeit des Rose Bengal-Tests mit anderen Techniken wie Seroagglutination (fieberhafte Antigene) verglichen und festgestellt, dass trotz guter Korrelation Einzelfälle auftraten, in denen der fieberhafte Antigen-Test negativ war und Rose de Positive Fackel.
Der erhaltene Unterschied war auf die Tatsache zurückzuführen, dass diese Patienten eine Unterklasse von IgG-Antikörpern gegen Brucella abortus mit einer besseren Bindungskapazität bei saurem pH hatten, weshalb sie mit dem Rose Bengal-Reagenz reagieren konnten, jedoch nicht mit dem von fieberhaften Antigenen.
In diesem Sinne haben sie vorgeschlagen, die Reagenzien der Fieberantigen-Technik auf einen sauren pH-Wert zu modifizieren, damit sie diese Art von Fall nachweisen können.
Basis
Das Rose Bengal Reagenz besteht aus einer Antigensuspension. Es besteht aus dem S99-Stamm von Brucella abortus, verdünnt in einem sauren Laktatpuffer (pH 3,6), plus Phenol und dem Rose Bengal-Farbstoff.
Daher wird in der Probe nach Anti-Brucella-Antikörpern gesucht. Wenn diese vorhanden sind, reagieren sie mit dem Reagenzantigen und es wird eine makroskopisch sichtbare Agglutinationsreaktion beobachtet. Der Test erkennt entweder IgM-Antikörper oder IgG-Antikörper.
Dies bedeutet, dass es die Krankheit sowohl in seinem akuten Stadium, in dem IgM-Antikörper vorherrschen, als auch in seinem chronischen Stadium, in dem IgG-Antikörper vorherrschen, nachweisen kann.
Dies stellt einen Vorteil dar, da es die Empfindlichkeit des Tests erhöht, gleichzeitig aber auch einen Nachteil darstellt, da es nicht zwischen einer Stufe und einer anderen unterscheidet, da die Reaktion mit IgM- und IgG-Antikörpern identisch ist.
Der Test muss immer zusammen mit einer Negativkontrolle und einer Positivkontrolle durchgeführt werden. Die Negativkontrolle enthält Tierserum ohne Antikörper und die Positivkontrolle enthält Serum tierischen Ursprungs mit 50 IE / ml Anti-Brucella-Antikörpern.
Verwenden
Brucellose ist eine schwere Krankheit, die chronisch und gefährlich ist. Daher ist es sehr wichtig, dass sie frühzeitig diagnostiziert wird. Es handelt sich um eine Zoonose, und Menschen können durch direkten Kontakt mit kontaminiertem Material infiziert werden. Die am stärksten gefährdeten Personen sind Tierärzte und Tierpfleger.
Eine Infektion kann unter anderem auch durch den Verzehr von infiziertem rohem Fleisch auftreten.
Diese Krankheit greift lokal oder systemisch an. Die systemische Form ist die schwerwiegendste, da verschiedene Organe betroffen sein können, darunter das Endothelsystem des Retikulums (Leber, Milz, Knochenmark), die Haut (Cellulitis und Lymphadenopathie), das Atmungssystem (Pneumonie) und der Bewegungsapparat (Arthritis, unter anderem Sakroiliitis und Spondylitis).
Der Rose Bengal-Test ist eine sehr nützliche Technik für die Durchführung eines ersten Screenings, da er sehr kostengünstig, einfach zu verwenden und von großer Spezifität und Empfindlichkeit ist.
Fälle von falsch negativen und falsch positiven Ergebnissen sind sehr selten und können bei Menschen mit sehr niedrigen Antikörpertitern (<25 IE / ml) bzw. extrem hohen (> 1000 IE / ml) auftreten.
Prozess
Materialien
-Rose Bengal Kit
-Agglutinationsplatte weißer Hintergrund
-50 µl Pipette
-Rotator (optional)
-Wirbel
Technik (qualitative Methode)
Kommerzielle Rose Bengal-Kits werden mit gebrauchsfertigen Reagenzien geliefert.
-Temperieren Sie die Reagenzien, bevor Sie mit der Arbeit beginnen.
-Die Agglutinationsplatten haben Kreise, jeweils für eine andere Probe. Verwenden Sie 3 Kreise, den ersten für die Negativkontrolle, den zweiten für die Probe und den dritten für die Positivkontrolle.
- Legen Sie einen Tropfen oder 50 µl der Kontrollen und der Probe in den entsprechenden Kreis.
- Mischen Sie das Rose Bengal-Reagenz mit einem Wirbel. Platzieren Sie einen Tropfen neben den zuvor platzierten.
-Mischen Sie mit hölzernen Zahnstochern (verwenden Sie einen für jede Probe oder Kontrolle). Machen Sie kreisende Bewegungen und verteilen Sie sie so, dass Sie den gesamten Kreis abdecken.
Quelle: Bilder aus dem Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Bildlayout bearbeitet.
- Legen Sie die Platte mit 80 bis 100 U / min auf einen automatischen Rotator oder drehen Sie sie 4 Minuten lang manuell. Lesen Sie den Beweis am Ende dieser Zeit.
-Überprüfen Sie, ob die Kontrollen wie erwartet gaben. Vergleichen Sie die Reaktion der Testprobe mit den Kontrollen. Als positiv melden, wenn eine Agglutination beobachtet wird, und als negativ, wenn keine Agglutination vorliegt.
Ein positiver Test zeigt an, dass der Patient eine Menge von mindestens 25 IE / ml Anti-Brucella-Antikörpern aufweist.
Interpretation einer positiven (mit Agglutination) und negativen (ohne Agglutination) Reaktion. Quelle: Citrullin. Bearbeitetes Bild.
Technik (semi-quantitativ)
Wenn bei der qualitativen Reaktion die Probe stark positiv ist, kann sie halbquantifiziert werden. Hierzu werden serielle Doppelverdünnungen der Probe mit physiologischer Kochsalzlösung durchgeführt. Das zuvor beschriebene Verfahren wird mit jeder Verdünnung durchgeführt.
Es wird auch durch makroskopische Beobachtung der Agglutination interpretiert. Das Ergebnis ist der Titer der höchsten Verdünnung, bei der ein positives Ergebnis beobachtet wurde.
Zur Berechnung des ungefähren Wertes von Anti-Brucella-Antikörpern wird die folgende Formel verwendet:
25 IE / ml x Reaktionstiter = IE / ml
Wenn beispielsweise ein Patient im semi-quantitativen Test bei der Verdünnung ½, ¼ und 1/8 positiv testet und ab der Verdünnung 1/16 negativ zu werden beginnt, bedeutet dies, dass der Patient einen Titer von 8 hat .
Anwendung der Formel:
25 IE / ml × 8 = 200 IE / ml
QA
-Die Kits haben ein Ablaufdatum und müssen beachtet werden. Sollte nicht verwendet werden, wenn das Reagenz abgelaufen ist.
- Stellen Sie bei der Verwendung sicher, dass das Reagenz keine festen Partikel enthält, da dies ein Zeichen für eine Verschlechterung ist.
- Halten Sie zwischen 2 und 8 ° C.
- Nicht einfrieren, da dies das Reagenz unwiederbringlich beschädigt.
- Führen Sie den Test immer zusammen mit den Negativ- und Positivkontrollen durch.
-Die Technik toleriert Serumproben mit einem gewissen Grad an Lipämie und Hämolyse. Es wird jedoch nicht empfohlen, übermäßig lipämische und hämolysierte Seren zu verwenden. Beide Bedingungen verändern die Testergebnisse.
- Bringen Sie die Reagenzien immer auf Raumtemperatur, bevor Sie mit der Analyse beginnen.
- Interpretieren Sie keine Reaktionen, die länger als die empfohlene Zeit dauern, da dies zu falsch positiven Ergebnissen führt, da das Reagenz nach einer bestimmten Zeit ausfällt und eine positive Reaktion simuliert.
-Die Technik ist 100% empfindlich und hat eine Spezifität von 98%.
- Nach einer Halbquantifizierung von 1000 IE / ml besteht die Möglichkeit, einen Prozone-Effekt zu beobachten (falsch negativ aufgrund eines Überschusses an Antikörpern im Vergleich zur Menge an Antigenen).
Verweise
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