BLUTAUSSTRICH: EIGENSCHAFTEN, TYPEN, TECHNIKEN UND HISTOLOGIE - BIOLOGIE - 2024

Der Blutausstrich ist ein peripherer Blutausstrich , mit dem die im Blutkreislauf vorhandenen Komponenten analysiert werden. Die Beobachtung eines Blutausstrichs liefert hämatologische Daten, die für die Diagnose und Nachverfolgung vieler Pathologien sehr nützlich sind.

Der Blutausstrich ermöglicht die Quantifizierung der Anzahl der verschiedenen Arten weißer Blutkörperchen (Leukozytenformel) sowie die Analyse der Morphologie und Form von Erythrozyten, Leukozyten und Blutplättchen.

Vorbereitung des Blutausstrichs. Quelle: Blut in einem Laborglas. Public DomainPictures.net

Darin können Anomalien in der Anzahl der Zellen festgestellt werden, wie: Leukozytose oder Leukopenie, Lymphozytose oder Lymphopenie, Neutrophilie oder Neutropenie, Thrombozytose oder Thrombozytopenie und Eosinophilie. Es können auch Anomalien der Zellgröße und -form auftreten.

Zusätzlich ist es möglich, verschiedene Arten von Anämien, Leukämien und bakteriellen oder Blutparasiteninfektionen zu erkennen.

Hierzu gibt es verschiedene Arten von Abstrichen, die je nach Zweck der Studie durchgeführt werden. Es gibt dünne Abstriche und dicke Abstriche. Diese Abstriche unterscheiden sich in der Ausführungstechnik und dem Zweck der Studie.

Diejenigen mit feinen Tropfen werden als Ergänzung zur vollständigen Hämatologie verwendet. Dies liefert Daten zur Leukozytenformel zusätzlich zur Analyse der Form und Morphologie der drei Zellreihen, aus denen das Blut besteht: rote Reihen, weiße Reihen und Blutplättchen. Sie dienen zwar auch als Ergänzung zur Untersuchung des dicken Blutfilms.

Der dicke Film wird zur Diagnose von durch Hämoparasiten verursachten Krankheiten wie Malaria oder Malaria, Toxoplasmose, Leishmaniose, Chagas-Krankheit, Babesiose und Mikrofilariose verwendet.

Eigenschaften eines Blutausstrichs

Ein guter Blutausstrich muss bestimmte Eigenschaften erfüllen. Unter ihnen können wir erwähnen:

-Die Probe muss die Mindestqualitätsanforderungen erfüllen, um repräsentativ zu sein.

-Die Probenahme muss gut durchgeführt werden.

- Rechtzeitige Ausführung des Abstrichs.

-Wenn mit venösem Blut durchgeführt, verwenden Sie ein Antikoagulans, das die Zellen nicht deformiert, und mischen Sie das Röhrchen, bevor Sie den Abstrich machen.

-Wenn es mit Kapillarblut gemacht wird, verwerfen Sie den ersten Tropfen.

-Die Ausbreitung muss homogen sein. Dies stellt sicher, dass die Zellen gleichmäßig verteilt sind und dass die Blutzellen gut auf Form und Anzahl analysiert werden können.

-Die Seiten des Abstrichs sollten von Anfang bis Ende glatt sein.

-Der Abstrich muss einen Rand von 1 bis 2 mm zu den Seiten des Objektträgers einhalten.

-Die Dicke der Schicht sollte von Anfang bis Ende allmählich abnehmen (Abstrich feiner Tropfen nach der Objektträgermethode).

-Es muss ordnungsgemäß gekennzeichnet sein, um Verwechslungen der Proben zu vermeiden.

-Fixieren und färben Sie es richtig, um die Blutelemente klar zu beobachten.

- Lassen Sie den Abstrich sehr gut trocknen, bevor Sie das Präparat unter dem Mikroskop montieren. Wenn Sie Immersionsöl auf einen feuchten Abstrich geben, bilden sich Mizellen, die verhindern, dass die Zellen gesehen werden.

Arten von Blutausstrichen

Periphere Blutausstriche können in dünne und dicke Abstriche eingeteilt werden. Diejenigen mit einer dünnen Schicht werden zur Untersuchung der Leukozytenformel und zur morphologischen Beobachtung von Blutzellen verwendet. Es können auch extrazelluläre Bakterien wie Borrelien und intrazelluläre Hämoparasiten wie unter anderem Plasmodium beobachtet werden.

In dem feinen Blob kann die Spezies des Parasiten identifiziert werden, daher ist es eine spezifischere Technik als der dicke Blob, aber der dicke Blob ist empfindlicher, da es sich um eine Konzentrationstechnik handelt, die für die erschöpfende Suche nach extrazellulären Hämoparasiten verwendet wird.

Es gibt zwei Arten von Feinabstrichen: die auf Objektträgern und die auf Deckgläsern. Die dicken Abstriche werden auf Objektträgern durchgeführt.

Techniken zur Blutentnahme

Blutausstriche können aus einer Kapillarpunktion oder einer mit Antikoagulans entnommenen venösen Probe gemacht werden. Wenn es mit Antikoagulans aus Blut durchgeführt wird, kann der Abstrich bis zu 2 Stunden nach der Probenentnahme hergestellt werden.

Bei der Verwendung von Antikoagulanzien, die die Blutzellen nicht deformieren, ist Vorsicht geboten. Die beste Option ist EDTA. Im Gegenteil, die Verwendung von Antikoagulanzien wie Trinatriumcitrat sollte vermieden werden.

Wenn die Probe durch Kapillarpunktion entnommen wird, sollte der Abstrich unmittelbar vor den Blutgerinnseln verlängert werden.

Der erste Tropfen sollte verworfen werden, damit der nächste Tropfen spontan entweichen kann, um eine Verdünnung der Probe mit Gewebeflüssigkeit zu vermeiden. Es ist die am meisten empfohlene Technik zur Beobachtung der Zellmorphologie, da das Blut keine Zusatzstoffe enthält.

Für die Beobachtung von Hämoparasiten kamen Solari et al. In ihrer Forschungsarbeit zu dem Schluss, dass beide Techniken (Venenpunktion und Kapillare) gleich effizient sind.

Arten der Blutentnahme: A. Kapillarpunktion. B. Venenpunktion. Quelle: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Techniken zur Vorbereitung des Blutausstrichs

Der Blutausstrich kann manuell auf Objektträgern oder auf einem Deckglas oder Objektträger durchgeführt werden. Dies ist auch durch automatisierte Geräte möglich.

-Schieberabstriche

Diese Technik wird von den meisten Labors aufgrund ihrer einfachen Handhabung bevorzugt.

Platzieren Sie mit einer Pasteurpipette einen nicht sehr dicken oder sehr feinen Blutstropfen in der Mitte eines Endes eines sauberen Objektträgers.

Der Abstrich wird mit Hilfe eines anderen Objektträgers mit geschliffenem Ende gemacht. Der geschliffene Glasobjektträger wird senkrecht zum gegenüberliegenden Ende des Tropfens platziert.

Es neigt sich zu einem Winkel zwischen 30 - 45 ° und gleitet zum Tropfen; Bei Berührung dehnt es sich linear über die Kante des Bodenschlittens aus und mit einer konstanten und definierten Bewegung kehrt das Blatt zurück. vor Erreichen des Endes wird der Schlitten angehoben.

Auf diese Weise wird eine homogene Schicht über die Oberfläche des Empfangsobjektträgers verteilt.

Der Abstrich darf trocknen. Es wird dann fixiert und mit dem bevorzugten Fleck gefärbt. Vor dem Betrachten unter dem Mikroskop gut trocknen lassen. Ein Tropfen Öl wird auf das Gesicht gegeben, das den Abstrich zeigt, und unter einem Lichtmikroskop beobachtet.

Blutausstrich auf Objektträger. Oberes Bild: ungefärbter Abstrich. Unteres Bild: fleckiger Abstrich. Quelle: Coinmac

Teile des Abstrichs auf Objektträgern

Bei dieser Art von Abstrich können drei definierte Bereiche unterschieden werden: der Kopf, der Körper und der Schwanz. Der Kopf entspricht dem Bereich, in dem der Abstrich beginnt, er ist der dickste Bereich und es ist nicht gut zu beobachten.

Der Körper ist der zentrale oder mittlere Teil des Abstrichs, er ist der beste Bereich, den man unter dem Mikroskop beobachten kann, da dort die Zellen gleichmäßig verteilt sind und ihre Morphologie erhalten bleibt.

Der Schwanz entspricht dem letzten Teil des Abstrichs; hier ist die Verteilung nicht mehr gleichmäßig und die Erythrozytenmorphologie geht tendenziell verloren.

Qualitätskontrolle in der Folientechnik

Bei dieser Technik spielt es eine grundlegende Rolle:

- Reinigen und Entfetten des Objektträgers: Dies garantiert ein gutes Gleiten der Probe.

-Die Größe des Tropfens: Bei sehr großen Tropfen wird ein dickerer und längerer Abstrich erzielt, bei einem sehr kleinen Tropfen ist der Aufstrich kürzer und extrem fein.

-Die in der Erweiterung angewendete Geschwindigkeit: Je niedriger die Geschwindigkeit, mit der der Abstrich dünner wird, desto höher ist die Geschwindigkeit.

-Der Ausführungswinkel: Je kleiner der Winkel, desto feiner der Abstrich, desto größer der Winkel, desto dicker.

-Schritt auf Deckglas

Es ist nicht weit verbreitet, da der Umgang mit zerbrechlichen Deckgläsern umständlich ist, bietet jedoch große Vorteile, da eine bessere Verteilung der Zellen im gesamten Abstrich erzielt wird.

Ein nicht sehr dicker, nicht sehr feiner Tropfen wird in die Mitte eines Deckglases gegeben. Sofort wird ein weiteres Deckglas so darauf gelegt, dass die Spitzen beider Deckgläser hervorstehen und einen Stern bilden.

Der Tropfen verteilt sich spontan auf der Oberfläche beider Deckgläser. Am Ende der Verlängerung wird jeder Schlitten schnell auf die gegenüberliegende Seite (einer nach rechts und der andere nach links) geschoben.

Die Technik liefert zwei Abstriche anstelle von einem.

Sie werden mit der ausgebreiteten Seite nach oben zum Trocknen gelegt. Nach dem Trocknen wird es fixiert und mit der Technik der Wahl gefärbt. Lass es trocknen. Ein Tropfen Immersionsöl wird auf einen Objektträger gegeben, der Abstrich wird mit der Abstrichseite nach unten gelegt und unter einem Mikroskop betrachtet.

Qualitätskontrolle in der Deckglas-Technik

Um einen guten Abstrich für diese Technik zu erhalten, ist es wichtig:

- Reinigen Sie die Deckgläser (hilft der Probe, reibungslos zu gleiten).

-Die Größe des Tropfens (beeinflusst die Dicke des Abstrichs).

-Die Geschwindigkeit, mit der die Deckgläser getrennt werden (beeinflusst die Homogenität der Ausbreitung).

- Mit automatisierten Geräten

Sie können durch jedes dieser Teams durchgeführt werden: Spinner und Autoslide.

Der Spinner besteht aus einem Objektträger mit einem Blutstropfen auf einer speziellen Zentrifugenplatte. Die Probe wird bei hohen Geschwindigkeiten zentrifugiert; auf diese Weise entsteht ein homogener und feiner Abstrich der Probe. Es hat den Nachteil der Möglichkeit einer Hämolyse der Probe.

Der Autoslide ist ein Instrument, das die Bewegungen zur Ausführung des Abstrichs auf Objektträgern mechanisch ausführt. Sie können den Abstrich auch reparieren und färben. Es kann sogar an einige automatische Hämatologiezähler angepasst werden.

Dickschmiertechnik

Für die Suche nach Hämoparasiten werden zwei Abstriche empfohlen: einer mit einem feinen Tropfen und einer mit einem dicken Tropfen.

Führen Sie eine Kapillarpunktion durch und reinigen Sie den ersten Tropfen. Geben Sie einen feinen Tropfen auf einen Objektträger und streichen Sie wie zuvor beschrieben. Legen Sie für die dicke Perle eine große Perle auf einen anderen Objektträger und verteilen Sie sie auf einem Quadrat von 1,55 mm. Lassen Sie die beiden Abstriche trocknen.

Abstrichfärbung

Giemsa- oder Wright-Flecken können unter anderem für feine Tropfen verwendet werden. Giemsa oder May-Grunwald Giemsa-Färbung wird für dicke Abstriche empfohlen.

Giemsa-Fleck

Der Abstrich wird 3 Minuten mit Methanol fixiert, abgelassen und erneut trocknen gelassen. Der Abstrich wird dann 10-15 Minuten lang mit Giemsa-Fleck bedeckt. Es wird mit destilliertem Wasser gewaschen und trocknen gelassen. Zur Beobachtung unter dem Mikroskop wird ein Tropfen Immersionsöl gegeben.

Wrights Fleck

Der Abstrich wird 5 Minuten lang mit Wright-Fleck bedeckt. Verwerfen Sie die Pufferlösung und legen Sie sie 6 Minuten lang auf pH 6,8. Blasen Sie das Präparat zum Homogenisieren. Mit destilliertem Wasser waschen und trocknen lassen. Unter dem Mikroskop beobachten.

Arten von fehlerhaften Abstrichen

Es tritt bei Auszubildenden in der Feinabwurftechnik mit Objektträgern auf.

Abstriche mit Bereichen unterschiedlicher Dicke (dünn und dick dazwischen)

Dies liegt daran, dass die ausgeführte Bewegung während des Spreads nicht konstant war und Stopps und Neustarts durchführte.

Sehr kurzer Abstrich

Sie haben zwei Ursachen: Eine ist darauf zurückzuführen, dass die Bodenrutsche angehoben wurde, bevor sie das andere Ende der Rutsche erreicht. In diesem Fall ist es extrem dick und kurz.

Wenn andererseits der Abstrich kurz, aber dünn ist, liegt dies daran, dass die Größe des Tropfens sehr klein war.

Abstrich mit einer Rechenfläche gegen Ende des Abstrichs

Dies hat mehrere Ursachen: Zum einen ist die Bodenkante defekt, der auf den Empfangsschlitten ausgeübte Druck wird zum Zeitpunkt der Ausbreitung erhöht oder die Bodenkante des Schlittens ist abgenutzt.

Abstrich mit Vakuolenbildung oder klaren, abgerundeten oder elliptischen Bereichen

Sie sind auf die Verwendung von fettigen Abstrichen zurückzuführen (schlecht gewaschen und entfettet).

Sehr dicke oder sehr dünne Abstriche

Zu große Tropfen erzeugen von Anfang bis Ende sehr dicke Abstriche, und sehr kleine Tropfen erzeugen sehr feine Abstriche.

Histologie

Blutzellen können in einem Blutausstrich gesehen werden. Unter ihnen sind:

-Erythrozyten oder rote Blutkörperchen

Menschliches Blut, Erythrozyten oder rote Blutkörperchen und zwei weiße Blutkörperchen. Entnommen und bearbeitet von: Viascos. Ihre Beobachtung ist von größter Bedeutung. Auf dieser Ebene können Anämien, Thalassämie, Knochenmarkerkrankungen usw. festgestellt werden.

Die Anzahl der Erythrozyten oder roten Blutkörperchen beträgt bei Männern etwa 5 x 10 ⁶ mm3 und bei Frauen 4,5 x 10 ⁶ . Rote Blutkörperchen sind wie bikonkave Scheiben mit einer zentralen physiologischen Blässe geformt. Sie können separat gesehen werden (normal) oder Rouleaux-Stapel bilden (abnormal).

Abstriche zeigen auch Poikilozytose (rote Blutkörperchen verschiedener Formen), Anisozytose (rote Blutkörperchen verschiedener Größen), Anisopoikilozytose (verschiedene Formen und Größen), Anisochromie (verschiedene Farben), Erythroblasten (unreife rote Blutkörperchen), Mikrozytose (kleinere rote Blutkörperchen) ) und Makrozyten (größere Erythrozyten).

Wenn sie einen Mangel an Hämoglobin aufweisen und die zentrale Blässe zunimmt, spricht man von Hypochromie. Wenn eine normale rote Reihe beobachtet wird, wird sie als normozytisch und normochrom gemeldet.

-Weiße Blutzellen oder Leukozyten

weiße Blutkörperchen

Die normale Menge reicht von 5.000 bis 10.000 mm ³ . Sie verändern sich bei Infektionsprozessen, bei Allergien und bei Leukämie. Im Blutausstrich können verschiedene Arten unterschieden werden, die nachstehend erläutert werden.

Segmentierte Neutrophile

Sie machen 55-65% der gesamten Leukozyten aus. Sie messen zwischen 10-15 μm. Sie haben einen segmentierten oder gelappten Kern, der verschiedene Morphologien annimmt, daher wird er polymorphkernig genannt.

Sie haben reichlich neutrophiles Granulat in ihrem Zytoplasma und einige Azurophile. Sie nehmen bei bakteriellen Infektionen (Neutrophilie) zu, bei viralen Infektionen (Neutropenie) ab.

Morphologische Anomalien wie Pleokaryozytose (hyper-segmentierte Kerne), gewölbte (unreife Zellen) oder Makropolitiken (oval und groß) können beobachtet werden.

Sonstige Änderungen:

-Toxische Granulationen

-Pseudo-Pelger-Neutrophile (der Kern ist nicht gelappt oder zweilappig).

-Döhle Körper: dunkelblaue zytoplasmatische Einschlüsse.

-Erhöhte zytoplasmatische Basophilie.

-Intracytoplasmatische Vakuolen.

-Zelluläre Picknose (Verlust von Kernbrücken).

Segmentierte Eosinophile

Sie machen 1-3% der gesamten weißen Blutkörperchen aus. Sie messen 9-10 μm. Sie sind durch das Vorhandensein von reichlich acidophilen zytoplasmatischen Granulaten und wenigen Azurophilen gekennzeichnet. Sein Kern hat zwei Lobulationen. Ihre Zahl steigt bei Allergien und Krankheiten parasitären Ursprungs.

Segmentierte Basophile

Sie sind äußerst selten und machen 0-1% der Leukozyten aus. Sie messen 10-12 μm. Der Kern hat normalerweise unregelmäßige Ränder und kann zweilappig sein, ist jedoch aufgrund der großen Anzahl basophiler Grobgranulationen in seinem Zytoplasma nicht zu sehen. Sehr selten ist eine Basophilie zu beobachten.

Lymphozyten

Es sind kleine Zellen mit basophilem Zytoplasma, mit einem gut definierten, runden Kern mit kondensiertem Chromatin. Der Kern umfasst fast die gesamte Zelle. Sie machen 26-40% der Blutleukozyten aus. Sie nehmen bei Virusinfektionen (Lymphozytose) zu. Reaktive Lymphozyten können gesehen werden.

Monozyten

Zellen größer als Lymphozyten, mit größerem Zytoplasma und lockereren ovalen Chromatinkernen. Sie messen 9-12 μm. Das Zytoplasma ist reichlich vorhanden und erscheint normalerweise mit Standard-Färbetechniken hellgrau-blau. Unter den Veränderungen können vakuolisierte Monozyten und Monozytose beobachtet werden.

-Plättchen

Sie messen zwischen 1,5-3 μm. Seine Form ist rund oder oval. Der Normalwert liegt zwischen 150.000 und 350.000 Blutplättchen / mm3. Sie können bei einigen Virusinfektionen abnehmen. Sie haben keinen Kern und sind lila gefärbt. In dieser Reihe können Abnormalitäten auftreten, wie Makro- oder Mikroplättchen, Thrombozytose oder Thrombozytopenie und Blutplättchenfragmente.

Pathologische Elemente

Blutparasiten

Hämoparasiten, wie der Erreger von Malaria oder Malaria (Parasiten der Gattung Plasmodium), können in Blutausstrichen auftreten. Aus diesem Grund ist es wichtig, dass der Abstrich manuell analysiert wird, da automatisierte Geräte diesen Befund verfehlen.

Bakterien

Bei Pathologien wie rezidivierendem Fieber oder Lyme-Borreliose kann sein Erreger beobachtet werden. In diesem Fall entspricht es Borrelia recententi spirochetes und Borrelia burgdorferi im Blutausstrich.

Unreife Zellen

Schwere Fälle werden unter anderem bei Leukämien, Leukämoidreaktionen und Leukoerythroblastenreaktionen beobachtet. Bei bakteriellen Infektionen kann es zu leichten Abweichungen nach links kommen (Vorhandensein von Gaunern). Erythroblasten können auch bei einigen Anämien auftreten.

Verweise

1. Blut und hämatopoetisches Gewebe. Verfügbar unter: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Engel. Klinische Laborinterpretation. 8. Auflage. Editorial Médica Panamericana.
3. Solari Soto L., Soto Tarazona A., Mendoza Requena D., Llanos Accounts A. Vergleich der parasitären Dichten bei dickem venösem Blutstropfen mit Akupressur bei der Diagnose von Malaria vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Verfügbar unter: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Bedeutung der Untersuchung des peripheren Blutausstrichs bei älteren Menschen. Medisur 2017; 15 (3): 362 & ndash; 382. Verfügbar unter: scielo.sld
5. Grinspan S. Die Untersuchung des peripheren Blutausstrichs. Medizinische Weiterbildung. Verfügbar unter: bvs.hn/RMH