LIA-AGAR (LYSINEISEN): GRUNDIERUNG, HERSTELLUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Der Agar LIA (Lysine Iron) ist ein biochemischer Test zur Identifizierung von Bakterien der Enterobacteriaceae-Familie. Dieses Medium wurde von Edwards und Fife basierend auf der Falkow-Formel erstellt.

Ursprünglich war dieser Test eine Brühe, die Peptonen, Hefeextrakt, Glucose, L-Lysin, Bromkresolpurpur und destilliertes Wasser enthielt. Edwards und Fife fügten Agar-Agar, Eisenammoniumcitrat und Natriumthiosulfat hinzu.

Positiver und negativer Test auf Lysin-Decarboxylierung. Quelle: Foto- und Diagrammeigenschaft des Autors MSc. Marielsa Gil

Der Test besteht im Wesentlichen darin, das Vorhandensein des Enzyms Lysin-Decarboxylase nachzuweisen, das mit der Carboxylgruppe der Aminosäure L-Lysin reagieren kann. Eine Desaminierung der Aminosäure kann auch aufgrund des Vorhandenseins des Enzyms Lysindeaminase auftreten.

Zusätzlich zeigt die Zusammensetzung des Mediums die Fähigkeit einiger Bakteriengattungen, Schwefelwasserstoff zu produzieren. Schließlich ist es auch möglich, die Erzeugung oder Nichterzeugung von Gas im Medium zu beobachten.

Basis

Peptonen und Hefeextrakt

Wie die meisten Kulturmedien enthält Lysin-Eisenagar Komponenten, die die Nährstoffquelle für das Bakterienwachstum darstellen. Diese Komponenten werden durch Peptonen und Hefeextrakt dargestellt.

Glucose

Ebenso enthält dieser Agar Glucose als fermentierbares Kohlenhydrat. Es ist bekannt, dass alle Bakterien in der Familie der Enterobacteriaceae Glucose fermentieren.

Dieser Schritt ist entscheidend, da er für die Ansäuerung des Mediums verantwortlich ist, eine wesentliche Bedingung dafür, dass das Enzym Lysin-Decarboxylase - falls vorhanden - auf sein Substrat einwirkt.

In einigen Bakteriengattungen kann eine Gasproduktion aufgrund von Glukosefermentation beobachtet werden.

Das Gas wird nachgewiesen, wenn der Agar in der Röhre verdrängt wird, wodurch ein leerer Raum am Boden der Röhre verbleibt, oder wenn das Medium in zwei oder mehr Teile gebrochen wird.

L-Lysin

Sobald Lysin decarboxyliert ist, werden ein Diamin (Cadaverin) und Kohlendioxid gebildet.

Die Decarboxylierung erfolgt in Gegenwart des Coenzyms Pyridoxalphosphat. Diese Reaktion ist irreversibel.

PH-Indikator (Bromkresolpurpur)

Alle pH-Änderungen, die im Medium durch die verschiedenen Reaktionen auftreten, werden durch den violetten Bromkresol-pH-Indikator erfasst.

In diesem Sinne wird das Medium bei Ansäuerung gelb und bei Alkalisierung kehrt das Medium zur ursprünglichen violetten oder violetten Farbe zurück.

Wenn aufgrund des Vorhandenseins des Enzyms Lysindeaminase eine Desaminierung von Lysin auftritt, bildet sich auf der Oberfläche eine rötliche Farbe, die typisch für die Gattungen Proteus, Providencia und einige Arten von Morganella ist.

Dies ist auf die Tatsache zurückzuführen, dass während des Desaminierungsprozesses Alpha-Keto-Kohlensäure gebildet wird, die in Gegenwart von Sauerstoff mit Ammoniumcitrat reagiert, was die oben erwähnte Farbe verursacht.

Eisenammoniumcitrat und Natriumthiosulfat

Andererseits werden Bakterien, die Schwefelwasserstoff produzieren, durch die Anwesenheit von Natriumthiosulfat (Schwefelquelle) und Eisenammoniumcitrat, dem Entwickler von H ₂ S, nachgewiesen.

Bakterien mit dem Enzym Thiosulfatreduktase können durch Reduktion des vorhandenen Natriumthiosulfats unter Bildung von Sulfit und Schwefelwasserstoff (H ₂ S) wirken.

Letzteres ist ein farbloses Gas, aber bei der Reaktion mit dem Eisensalz bildet es Eisenmetallsulfid, eine unlösliche Verbindung (sichtbarer schwarzer Niederschlag).

Die Fähigkeit zur Bildung von H ₂ S mit diesem Medium ist jedoch nicht sehr zuverlässig, da einige Lysin-Decarboxylase-negative Bakterien, die H ₂ S produzieren können, den schwarzen Niederschlag nicht bilden, da die Azidität des Mediums stört. Es wird daher empfohlen, mit anderen Medien zu sprechen, die Eisen enthalten.

Interpretation des Tests

Lysin-Decarboxylierung

Die Röhrchen sollten nach 24 Stunden Inkubation abgelesen werden, da sonst die Gefahr besteht, dass die Reaktion falsch interpretiert wird und falsch negative Ergebnisse gemeldet werden.

Es muss beachtet werden, dass die erste Reaktion, die auftreten wird, die Fermentation von Glucose ist, daher werden alle Röhrchen nach 10 bis 12 Stunden gelb.

Wenn am Ende der Inkubationszeit (24 Stunden) ein gelber Hintergrund mit einer violetten oder violetten Oberfläche beobachtet wird, ist die Reaktion negativ. Die violette Farbe der Oberfläche entspricht der Alkalisierung des Mediums durch Verwendung von Peptonen.

Eine positive Reaktion ist eine Reaktion, bei der der Boden und die Oberfläche des Röhrchens vollständig lila sind, dh zur ursprünglichen Farbe zurückkehren.

Wer also die Positivität des Tests bestimmt, ist die Basis oder der Hintergrund des Mediums. Im Zweifelsfall kann die Farbe mit einer nicht inokulierten LIA-Röhre verglichen werden.

Desaminierung von Lysin

Ein Röhrchen mit Lysin-Desaminierung hat eine rötlich-kastanienbraune Oberfläche und einen gelben (sauren) Hintergrund oder das gesamte Röhrchen rötlich-kastanienbraun.

Diese Reaktion wird als negativ für die Lysin-Decarboxylierung, aber positiv für die Lysin-Desaminierung interpretiert.

Diese Reaktion wird auf der Lünette definiert und interpretiert.

Herstellung von Schwefelwasserstoff (H.

Eine positive Reaktion wird durch das Auftreten eines schwarzen Niederschlags im gesamten oder einem Teil des Mediums beobachtet. Normalerweise zwischen der Kante der Abschrägung und der Basis.

Wenn der Niederschlag im gesamten Röhrchen auftritt, werden die anderen Reaktionen, die in der Mitte auftreten, nicht sichtbar.

Aufzeichnung der Ergebnisse

Bei der Interpretation des Tests werden die Ergebnisse wie folgt aufgezeichnet:

Zuerst wird die Abschrägung abgelesen, dann der Boden oder Block, dann die Produktion von H ₂ S und schließlich die Produktion von Gas.

Beispiel: K / A + (-). Das heisst:

• K: Alkalische Lünette (violette Farbe)
• A: Saurer Hintergrund (gelb), d. H. Negative Decarboxylierungsreaktion und negative Desaminierung.
• +: Produktion von Schwefelwasserstoff
• (-): Ohne Gas.

Vorbereitung

35 g des dehydrierten Eisenagar-Lysin-Mediums werden gewogen und in einem Liter destilliertem Wasser gelöst.

Erhitzen, bis sich der Agar vollständig aufgelöst hat. Dazu unter häufigem Rühren eine Minute kochen lassen. 4 ml des Mediums in 13/100 Reagenzgläser mit Baumwollkappen verteilen.

In einem Autoklaven 15 Minuten bei 121 ° C sterilisieren. Aus dem Autoklaven nehmen und schräg stehen lassen, so dass eine tiefe Basis und eine kurze Abschrägung vorhanden sind.

Im Kühlschrank bei 2-8 ° C lagern. Lassen Sie es vor der Aussaat des Bakterienstamms aufwärmen.

Die Farbe des dehydrierten Mediums ist beige und das vorbereitete Medium ist rotviolett.

Der End-pH des hergestellten Mediums beträgt 6,7 ± 0,2

Das Medium wird bei pH 5,2 oder weniger gelb und bei pH 6,5 und höher lila.

Anwendungen

Dieser Test wird zusammen mit anderen biochemischen Tests zur Identifizierung von Bazillen der Enterobacteriaceae-Familie verwendet.

Das Medium wird mit einer geraden Schlaufe oder Nadel ausgesät, ein oder zwei Einstiche werden am Boden des Röhrchens vorgenommen, und dann wird die Oberfläche des Mediums im Zickzack geritzt.

24 Stunden bei 35-37 ° C in Aerobiose inkubieren. Bei Bedarf wird es weitere 24 Stunden inkubiert.

Es ist hauptsächlich nützlich, laktose-negative Citrobacter-Arten von Salmonellas sp.

Quelle: Koneman E., Allen S., Janda W., Schreckenberger P., Winn W. (2004). Mikrobiologische Diagnose. 5. Aufl. Editorial Panamericana SA Argentinien.

Verweise

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4. Britannia Laboratories. Lysineisenagar. 2015. Verfügbar unter: britanialab.com
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6. Valtek Laboratories. Mittlere LIA 2009. Verfügbar unter: andinamedica.com