HÄMATOXYLIN-EOSIN-FÄRBUNG: EIGENSCHAFTEN, VERWENDUNGEN, TECHNIKEN - CHEMIE - 2025

Das Hämatoxylin-Eosin ist eine Färbetechnik unter Verwendung der Kombination der Farbstoffe Hämatoxylin und Eosin. Dieses Farbstoffpaar bildet ein perfektes Duo, da Hämatoxylin als basischer Farbstoff und Eosin als saurer Farbstoff fungiert.

Die Bezeichnung von basischen oder sauren Farbstoffen bezieht sich nicht auf den pH-Wert, den sie in Lösung erhalten, sondern spricht vom vorherrschenden Anteil in Bezug auf die anionischen oder kationischen Ladungen, die sie besitzen, oder durch den Ort der Chromophorgruppe.

Hämatoxylin-Eosin (HE) -gefärbtes Flimmerepithel Quelle: Todd Straus und Vladimir Osipov

In diesem Sinne wird Hämatoxylin als basischer (kationischer) Farbstoff angesehen und hat daher eine Affinität zu Säurestrukturen wie dem Zellkern. Während Eosin als saurer (anionischer) Farbstoff eine Affinität zu alkalischen oder basischen Strukturen wie Zellzytoplasma aufweist.

Aus diesem Grund wird diese Kombination von Farbstoffen häufig zur Gewebefärbung verwendet, da dadurch Kerne und Zytoplasmen klar unterschieden werden können. Die Kerne färben sich dunkelblau oder lila und das Zytoplasma rosa.

Die Hämatoxylin-Eosin-Färbung ist aufgrund ihrer einfachen Handhabung und geringen Kosten eine der am häufigsten verwendeten Färbetechniken auf dem Gebiet der Histologie und Zytologie. Es wird verwendet, um Zellen, dicke Nervenfasern und das Vorhandensein bestimmter Mikroorganismen in Geweben zu visualisieren, wie z. B. Parasiten, Pilze und Bakterien.

Eigenschaften

Hämatoxylin

Hämatoxylin ist ein neutraler Farbstoff. Die Komponente, die die Farbe liefert (Chromophor), befindet sich jedoch im kationischen oder basischen Zentrum des Moleküls. Daher seine Affinität zu Säurestrukturen. Seine chemische Formel lautet C ₁₆ H ₁₄ O ₆ und sein wissenschaftlicher Name lautet 7,11b-Dihydroindeno-Chrom-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -Pentol.

Es färbt hauptsächlich die Zellkerne, da diese sehr reich an Nukleinsäuren sind. Es kann auch zytoplasmatische Einschlüsse viralen Ursprungs färben.

Damit sich Hämatoxylin färben kann, muss es oxidiert und an ein Metall gebunden sein. Letzteres dient zur Fixierung am Gewebe, dh es wirkt als Beizmittel.

Wenn Hämatoxylin oxidiert wird, spricht man von Hämatein. Die Oxidation wird durch Einwirkung von Sauerstoff (Alterung) des Reagenzes oder durch Substanzen erreicht, die dessen Oxidation unterstützen (chemische Oxidation).

Eosin

Eosin ist ein Farbstoff, der rot oder rosa färbt. Es ist in Wasser unlöslich, obwohl es eine wasserlösliche Version gibt. Im Allgemeinen wird Eosin durch Auflösen in Alkohol (95 ° Ethanol) hergestellt.

Es färbt Zytoplasmen, Muskelfasern, zytoplasmatische Organellen und Kollagen, färbt jedoch keine Zellkerne. Dies liegt daran, dass es negativ geladen ist und daher eine Affinität zu positiv geladenen Strukturen aufweist.

Es gibt zwei Arten von Eosin "Y" und "B". Eosin "Y" ist als gelbes Eosin bekannt. Sein wissenschaftlicher Name ist Tetrabromfluorescein und seine chemische Formel ist C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

Andererseits wird Eosin "B" manchmal als bläuliches Erythrosin B bezeichnet. Sein wissenschaftlicher Name ist Dibromdynitrofluorescein und die Formel lautet C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Beide sind sehr ähnlich und der Unterschied zwischen der Verwendung des einen oder anderen ist nicht wirklich spürbar. Am beliebtesten ist jedoch Eosin "Y".

Eosin hat die Eigenschaft, zwischen einer lebenden und einer toten Zelle zu unterscheiden, da es die Membran nur durchqueren kann, um ihr Zytoplasma zu färben, wenn die Zellen tot sind, und das Zytoplasma der Zelle farblos lässt, wenn es am Leben bleibt.

Anwendungen

Färbung der Nervenfasern

Dicke Nervenfasern können mit Hämatoxylin-Eosin angefärbt und identifiziert werden. Es ist jedoch nicht zum Färben dünner Nervenfasern nützlich, da eine Silberfärbung erforderlich ist, um letztere sichtbar zu machen.

Histologische Hautschnittflecken

Bei der Färbung der Hornschicht der Haut wirkt als Farbstoff Eosin, da die Zellen auf dieser Ebene keinen Zellkern haben.

In der körnigen Hautschicht färbt Hämatoxylin das Keratohyalin-Granulat in den Granulatzellen stark an. Im Gegensatz dazu ist die Dornschicht der Haut schwach mit Hämatoxylin gefärbt, während die Grund- oder Keimschicht ziemlich gefärbt ist.

Eosin färbt das Zytoplasma aller Zellen und die Intensität der Farbe kann von Schicht zu Schicht variieren.

Hämatoxylin-Eosin-Färbung von Stuhlproben

Gómez et al., 2005, zeigten, dass die Hämatoxylin-Eosin-Färbung bei der Identifizierung von Fällen von Amöbiasis aufgrund von Entamoeba histolytica und Entamoeba dispar wirksamer war als die Methode der frischen Visualisierung (Kochsalzlösung und Lugol) bei Patienten mit akuter Durchfallerkrankung.

Es wurde auch gezeigt, dass es beim Nachweis von Erythrophagozytose (Amöben, die Erythrozyten verschlungen haben) hochempfindlich ist.

Färbung von histologischen Schnitten zur Diagnose einer Infektion

Walwyn et al. Schlugen 2004 die Verwendung von histologischen Färbungen zum Nachweis infektionsverursachender Mikroorganismen vor.

Mithilfe der Hämatoxylin-Eosin-Färbung konnten sie Infektionen sichtbar machen, die durch Clostridium, Actinomyces, Spirillen oder Candida verursacht wurden. Sie beobachteten auch das Vorhandensein des Parasiten Sarcoptes escabiei in Hautschnitten und virale Einschlüsse, die durch Cytomegalievirus und Herpes in Schnitten verschiedener Gewebe verursacht wurden.

Techniken

Für histologische Proben

Die Färbung des histologischen Schnitts durchläuft eine Reihe von Schritten. Das erste ist, den histologischen Abschnitt zu erhalten. Dies muss gewachst werden, um später die Schnitte (ultrafein) mit einem Mikrotom zu erhalten. Die Technik besteht aus folgenden Schritten:

1-Beseitigung von überschüssigem Paraffin : Hierfür können Sie Xylol oder Häm-D verwenden und 3-5 Minuten eintauchen.

2-Rehydratisierung der Probe: Dies wird erreicht, indem die Probe in absteigender Reihenfolge (100 °, 90 °, 70 °) in verschiedene Konzentrationen von Alkoholen (Ethanol) getaucht wird. In allen Fällen für 7 Minuten.

3-Eliminierung von überschüssigem Alkohol: Dazu wird er 7 Minuten in Wasser getaucht.

4-Färbung mit Hämatoxylin: Die Probe wird 6-10 Minuten in eine Schale mit Hämatoxylin getaucht. Die Belichtungszeit hängt von der Größe und Dicke der Probe ab.

5-Eliminierung von überschüssigem Hämatoxylin: Es wird 5 Minuten lang mit Wasser gewaschen und dann wird ein schneller Durchgang (10-20 Sekunden) durch sauren Alkohol durchgeführt. Später wird es erneut 5 Minuten mit Wasser gewaschen. Dann wird es 1 Minute bei 96 ° in Ethanol getaucht.

6-Färbung mit Eosin: Dazu wird die Probe 5 Minuten in die Eosinschale getaucht.

7-Dehydratisierung der Probe : Dazu werden die Alkoholschalen (Ethanol) durchlaufen, diesmal jedoch in aufsteigender Reihenfolge. (70 °, 90 °, 100 °). (Für 5 Sekunden, 5 Sekunden bzw. 1 Minute).

8-Klärung der Probe : Dazu wird sie 5-10 Minuten lang Xylol ausgesetzt und getrocknet, um dauerhaft mit Kanada-Balsam oder einem ähnlichen Material zu versiegeln.

Für Stuhlproben suchen

Ein Abstrich wird auf einem Objektträger mit dem Stuhl des Patienten gemacht und 5 Minuten lang mit 80% Alkohol fixiert. Das Blatt wird 5 Minuten in Hämatoxylin getaucht und sofort mit Wasser gewaschen.

Anschließend wird es schnell in sauren Alkohol und dann in Ammoniakwasser getaucht. Es wird mit Wasser gewaschen. Es wird 5 Minuten in Eosin gefärbt. Die Probe wird wie im Stand der Technik erläutert dehydratisiert und schließlich mit Xylol gespült.

Vorbereitung der Reagenzien

- Hämatoxylin

In einem Liter destilliertem Wasser werden 50 g Kalium- oder Ammoniumaluminiumsulfat gelöst. Nach vollständiger Auflösung 1 g kristallisiertes Hämatoxylin zugeben. Nach dem vollständigen Auflösen wird 1 g Zitronensäure zusammen mit 50 g Chloralhydrat und 0,2 g Natriumiodat zugegeben.

Die Mischung wird 5 Minuten gekocht, dann abkühlen gelassen und filtriert, um alle verbleibenden festen Partikel zu entfernen. Das so hergestellte Reagenz kann sofort verwendet werden.

- Eosin

Es kann auf alkoholischer Basis oder auf Wasserbasis hergestellt werden.

Alkoholisches Eosin

In 100 ml Ethanol bei 95 ° werden 0,5 g Eosin "Y" gelöst. Dann einige Tropfen Eisessig hinzufügen.

2% wässriges Eosin

In 1250 ml destilliertem Wasser werden 25 g wasserlösliches Eosin "Y" gelöst. Dann einige Tropfen Eisessig hinzufügen.

Saurer Alkohol

0,5 ml konzentrierte Salzsäure abmessen und mit absolutem Alkohol auf 100 ml auffüllen.

Ammoniakwasser

0,5 ml konzentriertes Ammoniak messen und mit destilliertem Wasser auf 100 ml auffüllen.

Verweise

1. Navarrete, G. Histologie der Haut. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130 & ndash; 133. Verfügbar unter: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N., Molina A., García M., Castillo J., Castillo J., García R., Fonseca I., Valenzuela O.
3. Identifizierung von Entamoeba histolytica / E. Dispar durch die frische Amöbentechnik gegen seine Färbung mit Hämatoxylin-Eosin bei akutem Durchfall. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Verfügbar unter: medigraphic.com
4. Walwyn V., Iglesias M., Almarales M., Acosta N., Mera A., Cabrejas M. Nützlichkeit histologischer Techniken zur Diagnose von Infektionen in anatomischen Proben. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Verfügbar unter: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW Reagenzien. Hämatoxylin-Eosin-Färbung. 2017, Spanien. Verfügbar unter: itwreagents.com
6. Eosin. Wikipedia, die freie Enzyklopädie. 7. November 2018, 08:18 UTC. 4. August 2019, 22:13 Uhr en.wikipedia.org
7. "Hämatoxylin." Wikipedia, die freie Enzyklopädie. 3. Mai 2019, 11:23 UTC. 4. August 2019, 22:48 wikipedia.org