LAKTOSEBRÜHE: GRUNDIERUNG, ZUBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Die Laktosebrühe ist ein Mittel eines nicht selektiven flüssigen Kulturmediums, das hauptsächlich als Voranreicherung bei der Isolierung von Salmonellenstämmen aus der mikrobiologischen Analyse zu verarbeiteten Lebensmitteln, Milchprodukten oder Wasser verwendet wird. Dies wird von der Internationalen Kommission für mikrobiologische Spezifikationen für Lebensmittel (ICMPF) empfohlen.

Das Medium enthält einen enzymatischen Verdau von Gelatine, Fleischextrakt und Laktose, Substanzen, die für das Bakterienwachstum notwendig sind. Darüber hinaus ist Laktose ein fermentierbares Kohlenhydrat, weshalb einige Coliforme es bei der Erzeugung von Gas abbauen können.

Laktationsbrühen mit Trübung. Quelle: Foto des Autors MSc. Marielsa Gil

Aus diesem Grund wird Laktosebrühe von der American Public Health Association (APHA) für die vermutliche Untersuchung von koliformen Gesamt- und Stuhlbakterien empfohlen, was sie als hervorragende Alternative zum Ersatz von Tryptoselaurylsulfatbrühe in der Standardtechnik der wahrscheinlichsten Zahl (MPN) qualifiziert. ) zur mikrobiologischen Analyse von Proben von Lebensmitteln, Milch und Oberflächenwasser sowie von unterirdischen, Freizeit-, Haushalts- und Industrieabfällen.

Basis

Für die mikrobiologische Analyse einiger Proben ist der Voranreicherungsschritt wesentlich, um einen bestimmten Mikroorganismus zurückgewinnen zu können, der in sehr geringer Menge oder unter ungünstigen Bedingungen vorliegen kann, die seine Lebensfähigkeit verletzen oder minimieren.

Dies ist der Fall bei getrockneten und verarbeiteten Lebensmitteln, die möglicherweise mit Salmonellas sp. In diesen Fällen haben die Bakterien, wenn sie vorhanden sind, während des Produktherstellungsprozesses physischen und chemischen Missbrauch erlitten.

Auf diese Weise, dass Mikroorganismen unter anderem nachteiligen Faktoren wie Dehydration, Exposition gegenüber hemmenden oder toxischen Produkten und der Überlappung ausgesetzt sind, die durch die Anwesenheit anderer Bakterien in größerer Menge erzeugt wird.

In diesem Sinne wirkt die Laktosebrühe reparierend auf die beschädigten Strukturen des Mikroorganismus und bewirkt, dass er sich so erholt und vermehrt, dass er nachgewiesen werden kann.

Ebenso hat die Laktosebrühe die Fähigkeit, die hemmenden Substanzen zu verdünnen, die ihre Lebensfähigkeit beeinträchtigen können, und ermöglicht ihre Entwicklung. Darüber hinaus ist die Nährstoffzusammensetzung der Laktosebrühe von strategischer Bedeutung, um das Wachstum von Salmonella sp gegenüber anderen Mikroorganismen zu begünstigen.

Zur endgültigen Identifizierung muss es in andere definitive Kulturmedien subkultiviert werden.

Andererseits ermöglicht die Zusammensetzung des Mediums auch den Nachweis von laktosefermentierenden Mikroorganismen, die Gas produzieren.

Vorbereitung

Zur Herstellung eines Liters Laktosebrühe müssen 13 g des dehydrierten Mediums gewogen und in 1000 ml destilliertem Wasser gelöst werden.

Um das Medium im Wasser aufzulösen, kann die Lösung ein wenig, aber nicht zu stark erhitzt werden.

Sobald die Lösung homogen ist, wird sie wie folgt hergestellt: Wenn die Brühe zur Suche nach Coliformen verwendet werden soll, wird ein Rack mit Reagenzgläsern hergestellt, in das ein Durham-Fermentationsröhrchen verkehrt herum eingeführt wird.

Die Durham-Röhre ist ein sehr wichtiges Detail, da sie den Nachweis der Gasbildung ermöglicht, Daten, die bei der Suche nach Coliformen von großem Wert sind.

Sobald die Röhrchen fertig sind, werden 10 ml der Laktosebrühe in sie abgegeben, eine Menge, die ausreichen muss, um das gesamte Durham-Röhrchen zu bedecken.

Wenn die Laktosebrühe als Voranreicherungsbrühe verwendet werden soll, ist es nicht erforderlich, ein Durham-Fermentationsröhrchen zu platzieren. In diesem Fall wird eine größere Menge Medium (225 ml) benötigt, die in 500-ml-Flaschen, mit weitem Mund und mit einem wärmebeständigen Schraubverschluss serviert wird.

Anschließend werden die Röhrchen oder Kolben 15 Minuten lang bei 121 ° C autoklaviert.

Das Medium muss bei 25 ° C einen End-pH von 6,9 ± 0,2 aufweisen.

Die Brühen werden bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahrt.

Vor Gebrauch müssen die Brühen auf Raumtemperatur gebracht werden.

Andererseits kann die Laktosebrühe auch in doppelter Konzentration hergestellt werden.

Einige Laboratorien fügen der Laktosebrühe als pH-Indikator Bromkresolpurpur hinzu, um die Röhrchen anzuzeigen, in denen die Laktose aufgrund der Farbänderung fermentiert wurde. In diesem Fall nimmt die Brühe eine violette Farbe an und wird bei Gärung gelb.

Anwendungen

In mikrobiologischen Labors wird häufig Laktosebrühe verwendet, da es sich um ein relativ kostengünstiges Medium handelt, das zuverlässige und schnelle Ergebnisse liefert (24 bis 48 Stunden).

Es kann zur Analyse von Gesamt- und Fäkalkoliformen in Nahrung und Wasser oder als Voranreicherungsbrühe für Salmonellen verwendet werden.

Voranreicherung

Die Voranreicherung ist ein Schritt vor der Probenanreicherung, der die Rückgewinnung von Bakterien der Gattung Salmonella in verarbeiteten Lebensmitteln erheblich verbessert.

Dazu wird die feste Lebensmittelprobe (25 g) oder Flüssigkeit (25 ml) in 225 ml Laktosebrühe ausgesät und 24 bis 48 Stunden inkubiert. Anschließend wird es in einem angereicherten Medium wie Selenit-Cystin-Brühe oder Tetrathionat-Brühe subkultiviert. Wechseln Sie dann zu XLD- und SS-selektiven Medien.

Gesamt- und fäkale coliforme Analyse

Es ist ein ausgezeichnetes Medium als Indikator für Stuhlkontamination.

Aus diesem Grund ist Laktosebrühe ideal für die vermutete Phase der coliformen Untersuchung nach der Most Probable Number-Methode.

Bei Proben, bei denen der Verdacht auf eine große Menge an Coliformen besteht, wird eine geringere Menge davon beimpft (1 ml), während bei Proben, bei denen der Verdacht auf eine geringere Menge an Coliformen besteht, ein größeres Probenvolumen (10 ml) beimpft wird.

Für die Analyse werden 10 ^-1 , 10 ^-2 , 10 ^-3 Verdünnungen hergestellt , wobei für jede verwendete Konzentration eine Batterie von 3-5 Röhrchen gebildet wird.

Aus jeder Verdünnung wird das gleiche Volumen in die Laktosebrühen ausgesät.

Die Röhrchen werden 24 Stunden inkubiert. Negative Brühen werden weitere 24 Stunden inkubiert.

Die Interpretation der Ergebnisse erfolgt durch Beobachtung von zwei Merkmalen: Das erste ist das Vorhandensein oder Nichtvorhandensein von Trübung, und da dieses Medium keinen pH-Indikator enthält, tritt keine Farbänderung auf.

Die zweite ist die Erzeugung oder Nichterzeugung von Gas. Gas kann in der Durham-Röhre leicht durch das Auftreten einer oder mehrerer Luftblasen in der Röhre nachgewiesen werden.

Es wird als positiv angesehen, wenn beide Eigenschaften beobachtet werden, dh Trübung bei der Gasproduktion. Positive Röhrchen sollten in Bestätigungsmedien (2% Brilliant Green Bile-Brühe und EC-Brühe) erneut ausgesät werden.

Qualitätskontrolle des Mediums

- Bei der Herstellung des Mediums ist es wichtig, nicht zu vergessen, die Durhams-Röhrchen zu platzieren, wenn der Zweck derselben darin besteht, Coliforme zu untersuchen.

- Das Medium vor dem Sterilisieren nicht überhitzen.

- Vor dem Sterilisieren in Reagenzgläsern verteilen, niemals danach.

- Nicht verwenden, wenn das Medium älter als 3 Monate ist.

- Nicht verwenden, wenn sich die üblichen Eigenschaften des Mediums ändern.

- Testen Sie bei der Herstellung einer Charge Laktosebrühe deren Qualität, indem Sie bekannte Stämme wie Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii und Klebsiella pneumoniae aussäen. Sie wachsen sehr gut mit Gasproduktion (Positivkontrolle).

- Es kann auch Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium oder Enterococcus faecalis enthalten, die gut wachsen, jedoch keine Gasproduktion aufweisen (Negativkontrolle).

- Es ist zu beachten, dass die ursprüngliche Farbe des dehydrierten Mediums beige und die des vorbereiteten Mediums sehr hell und transparent gelb ist. Wenn eine Änderung der Farbe oder des Aussehens beobachtet wird, kann sich diese verschlechtern.

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