EC BRÜHE: GRUNDLAGE, VORBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Die EG-Brühe oder Brühe Escherichia coli ist ein selektives flüssiges Kulturmedium. Dieses Medium wird von den Standardmethoden zur Zählung von Gesamt- und Fäkalkoliformen nach der wahrscheinlichsten Zahlentechnik (MPN) in Wasser- und Lebensmittelproben empfohlen, wobei der Hauptwirkstoff Escherichia coli ist.

EC-Brühe besteht aus Triptein, Lactose, Gallensalzen, Dikaliumphosphat, Monokaliumphosphat, Natriumchlorid und Wasser. Seine Formel ist strategisch darauf ausgelegt, das Wachstum von Gesamt- und Fäkalkoliformen zu fördern und die Entwicklung anderer begleitender Mikroorganismen zu verhindern.

Bildliche Darstellung der Zubereitung der EG-Brühe. Quelle: Pixabay.com

Das Escherichia coli-Bakterium ist das wichtigste fäkale Coliform, das als Kontaminant in Wasser- und Nahrungsquellen vorhanden ist und die Ursache für wichtige Magen-Darm-Erkrankungen ist.

Es sollte beachtet werden, dass es viele Serotypen von Escherchia coli gibt; Unter diesen können wir das enterohämorrhagische (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogene (EPEC), enterotoxigene (ETEC) und enteroaggregative (EAEC) erwähnen.

Dieses Medium hat die Fähigkeit, die Entwicklung aller von ihnen zu ermöglichen, ohne sie jedoch voneinander unterscheiden zu können. Dies erfordert zusätzliche Tests.

Die mikrobiologische Untersuchung von Wasser und Nahrungsmitteln anhand der wahrscheinlichsten Zahl (MPN) zur Suche nach Gesamt- und Stuhlkoliformen ist ein Protokoll, das aus mehreren Phasen besteht. vermutliche Phase, Bestätigungsphase und Abschlussphase. Die EG-Brühe wird in der Bestätigungsphase verwendet.

Basis

EG-Brühe

Das EC-Medium basiert auf der Bereitstellung der Nährstoffe, die für die optimale Entwicklung von Gesamt- und Fäkalkoliformen erforderlich sind, wobei die Escherichia coli-Bakterien enthalten sind.

Diese Nährstoffe werden durch Triptein bereitgestellt, das eine ausgezeichnete Quelle für Peptide und Aminosäuren darstellt. Darüber hinaus enthält es auch Laktose, ein fermentierbares Kohlenhydrat, das Energie liefert und zeigt, ob die Bakterien Gas produzieren.

Andererseits enthält das Medium Gallensalze, die den selektiven Charakter liefern, da es das Wachstum von grampositiven Mikroorganismen hemmt, die in der Probe vorhanden sein können.

Ebenso wirken Dikaliumphosphat und Monokaliumphosphat als pH-Ausgleichssystem. Dieses System ist notwendig, da die in der Brühe enthaltene Laktose dazu neigt, das Medium anzusäuern, wenn es von Mikroorganismen fermentiert wird, dies wird jedoch durch die Phosphatsalze kompensiert.

Daher sind diese Elemente wesentlich, da eine unkontrollierte Säure die ordnungsgemäße Entwicklung der gesuchten Mikroorganismen beeinflussen kann.

Natriumchlorid stabilisiert seinerseits das Medium osmotisch, während Wasser das Lösungsmittel für die vorhandenen gelösten Stoffe ist und dem Medium die flüssige Konsistenz verleiht.

Novobiocin-modifizierte EC-Brühe

Okrend und Rose stellten eine Vielzahl von EC-Brühen her, die als Novobiocin-modifizierte EC-Brühe bezeichnet werden. Die Modifikation bestand darin, die Konzentration der Gallensalze zu verringern und 20 mg / dl Novobiocin zuzusetzen.

Diese Modifikation begünstigt die Gewinnung von enterohämorrhagischen Escherichia coli-Stämmen (O157: H7).

Dieser bakterielle Serotyp verursacht eine schwere hämorrhagische Kolitis, die zu einem hämolytischen urämischen Syndrom (HUS) führen kann. Dies kann wiederum zu einem akuten Nierenversagen mit einer hohen Sterblichkeitsrate führen, die bei älteren Menschen bis zu 50% erreichen kann.

Aufgrund der Morbidität und Mortalität, die dieses Bakterium jährlich durch den Verzehr kontaminierter Lebensmittel verursacht, empfiehlt das US-Landwirtschaftsministerium (USDA) dringend die Verwendung dieses Mediums.

Vorbereitung

EG-Brühe

37,4 g des dehydrierten Mediums werden gewogen und in 1 Liter destilliertem Wasser gelöst. Die Mischung sollte 5 Minuten stehen gelassen werden. Anschließend wird es in einer Wärmequelle durch häufiges Rühren aufgelöst.

Nach dem Auflösen wird es in vorkonditionierte Reagenzgläser mit einem Durham-Röhrchen im Inneren verteilt. Im Autoklaven 15 Minuten bei 121 ° C sterilisieren.

Der pH-Wert des Mediums sollte 6,9 ​​± 0,2 betragen. Die Farbe des dehydrierten Mediums ist beige und das vorbereitete Medium ist hell bernsteinfarben.

Die Brühen werden bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahrt. Zum Zeitpunkt der Verwendung müssen die Brühen Raumtemperatur haben.

Andererseits kann die EG-Brühe auch in doppelter Konzentration hergestellt werden.

Novobiocin-modifizierte EC-Brühe

36,7 g dehydriertes Medium werden abgewogen und in 1 Liter Wasser gelöst. Der Rest der Zubereitung ist der gleiche wie oben beschrieben.

Verwenden

Gesamt- und fäkale coliforme Analyse

EC-Brühe ist ideal für die Bestätigungsphase der Untersuchung von Coliformen nach der NMP-Methode, sowohl in Wasserproben als auch in pharmazeutischen Produkten und Lebensmitteln.

Trübe, gasproduzierende Laktosebrühen, die in der vermutlichen Phase erhalten wurden, sollten in 2% hellgrüne Gallenbrühen und EC-Brühe nachgesät werden.

Für Gesamt-Coliforme werden EC-Brühen 24 bis 48 Stunden bei 37 ° C aerob inkubiert, und für fäkale Coliforme werden sie 24 bis 48 Stunden bei 44 ° C aerob inkubiert.

In beiden Fällen wird dies wie folgt interpretiert: Trübe Rohre mit Gasproduktion werden als positiv angesehen. Wenn innerhalb von 24 Stunden keine Gasproduktion erfolgt, wird die Inkubation bis zu 48 Stunden fortgesetzt.

EG-positive Brühen gehen in die vollständige Bestätigungsphase, die aus der Nachsaat auf selektiven Medien wie Mac Conkey-Agar, EMB-Agar oder Endo-Agar besteht.

Wenn die verwendete Brühe Novobiocin-modifiziertes EC ist, wird empfohlen, positive Röhrchen auf Mac Conkey-Agar mit Sorbit neu zu besäen.

QA

Jede Charge des vorbereiteten Mediums muss qualitätskontrolliert werden. Zunächst muss die Sterilität des Mediums bewertet werden. In diesem Sinne werden eine oder zwei Brühen ohne Inokulation in Aerobiose 24 Stunden bei 37 ° C inkubiert. Das erwartete Ergebnis ist eine transparente Brühe ohne Trübung oder Farbveränderung.

Zweitens muss das Wachstum bekannter Stämme bewertet werden, hierfür können folgende Bakterien verwendet werden: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

In allen Fällen wird eine zufriedenstellende mikrobielle Entwicklung erwartet, wobei eine trübe Brühe mit Gasproduktion für E. coli und ohne Gas für Salmonellen beobachtet wird.

Andere Stämme, die in die Kontrolle einbezogen werden können, sind: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Diese Stämme müssen vollständig inhibiert sein.

Empfehlungen

-Die Platzierung der Durham-Röhrchen ist für die Untersuchung von Coliformen unerlässlich.

- Verteilen Sie das Medium vor dem Sterilisieren in den Reagenzgläsern, niemals danach.

- Nicht verwenden, wenn das Medium älter als 3 Monate ist.

- Nicht verwenden, wenn eine Änderung der üblichen Eigenschaften des Mediums beobachtet wird.

Verweise

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