NEGATIVE FÄRBUNG: BEGRÜNDUNG, TECHNIK, VOR- UND NACHTEILE - BIOLOGIE - 2025

Die negative Färbung ist eine Methode zur speziellen Färbung, um das Vorhandensein der Kapsel in einigen Mikroorganismen , hauptsächlich Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae und Cryptococcus neoformans-, aus klinischen Proben oder Reinkulturen hervorzuheben.

Die direkte Probe, die üblicherweise zur Anwendung einer negativen Färbung verwendet wird, ist Liquor cerebrospinalis. Diese Technik stellt eine schnelle Alternative für die vermutete Diagnose von Meningitis dar, insbesondere von Cryptococcus neoformans.

A. Mit Tusche gefärbter Zahnstein, B. Cryptococcus neoformans var gatti, der in der Natur unter Verwendung von Nigrosin schwach eingekapselt ist. C. Cryptococcus neoformans var gatti mit einer dicken Kapsel, wie sie in ihrer parasitären Form gefunden wurde, unter Verwendung von Nigrosin. D. Cryptococcus neoformans mit leicht verdünnter Tusche. Gisell Quinde von Wikimedia Commons / CDC über Wikimedia Commons / Bildnachweis: Inhaltsanbieter: CDC / Dr. Leanor Haley, über Wikimedia Commons

Ebenso kann diese Färbung auf Sputum und sterile Flüssigkeiten im Allgemeinen sowie auf Stämme angewendet werden, die aus jungen Reinkulturen erhalten wurden. Diese Technik verwendet Nigrosin oder Tusche für ihre Ausführung; Daher ist es eine sehr einfache und wirtschaftliche Methode, die Informationen von großem diagnostischen Wert in kurzer Zeit liefert.

In diesem Sinne kann jedes Labor diese Färbung durchführen. Natürlich muss das Labor über kompetentes Personal verfügen, das in der Lage ist, isolierte oder knospende Hefen von Cryptococcus neoformans zu erkennen und sie von Leukozyten und Artefakten zu unterscheiden, die die Probe möglicherweise aufweist.

Basis

Nigrosin und Tusche arbeiten auf ähnliche Weise. Daher kann jede der beiden Substanzen austauschbar verwendet werden.

Diese Technik wird als negative Färbung bezeichnet, da sie im Gegensatz zu den übrigen Färbetechniken wirkt. Dabei bleibt die Struktur, die gesucht wird oder die man sehen möchte, ungefärbt; das heißt, Mikroorganismen.

Daher basiert die Färbung darauf, den Boden des Abstrichs mit einer dunklen Farbe zu färben. In diesem Szenario fallen die gekapselten Strukturen in hellen oder farblosen Farben auf.

Im Allgemeinen sind die Hefen erfrischend und von einem klaren Lichthof umgeben, der der Kapsel entspricht. Dies liegt daran, dass Tusche und Nigrosin Substanzen sind, die nicht in das Polysaccharid eindringen können, aus dem die Kapsel lebender Mikroorganismen besteht.

Es ist anzumerken, dass andere Strukturen, die in der direkten Probe vorhanden sein können, wie Leukozyten oder rote Blutkörperchen, ebenfalls nicht eindringen.

Wenn die Mikroorganismen jedoch tot sind, kann der Farbstoff in sie eindringen, so dass diese Färbung auch nützlich ist, um die Lebensfähigkeit der Mikroorganismen zu bewerten.

Technik

Materialien

Nigrosin

Nigrosin verdankt seinen Namen der schwarzen Farbe. Es ist eine synthetische Substanz, die durch Erhitzen des Gemisches organischer Verbindungen wie Nitrobenzin, Anilin und Anilinhydrochlorit unter Verwendung eines Katalysators (Eisen oder Kupfer) in dieser Reaktion erhalten wird.

Chinesische Tinte

Chinesische Tinte ist eine Substanz, die hauptsächlich von Asiaten zum Schreiben, zur Herstellung von Kunstwerken und zur monochromatischen Malerei verwendet wird. Es ist sehr beliebt in der chinesischen Kultur.

Es wird aus Tintenfischtinte gewonnen, die mit pulverisierter Holzkohle gemischt ist, dem Produkt der Verbrennung von Bäumen mit niedrigem Harzgehalt.

Es ist auch möglich, es aus dem Ruß aus der Verbrennung von Kohlenwasserstoffen (Pflanzenölen) zusammen mit einer Proteingelatine herzustellen, die ihm die richtige Konsistenz verleiht, um die Ausfällung von Kohlenstoffpartikeln zu vermeiden.

Spezifikationen für die Probenahme

- Es erfordert kein Fasten.

- Die CSF-, Sputum- oder sterile Flüssigkeitsprobe muss mindestens 1 ml Volumen enthalten und muss sofort bei Raumtemperatur ins Labor gebracht werden.

- CSF- und sterile Flüssigkeitsproben müssen von einem Facharzt entnommen werden.

- Es kann sich auch um eine Reinkultur eines verdächtigen Stammes handeln, der mit den oben genannten Krankheitserregern in Verbindung steht.

Ausführung der Technik mit direkten Proben

- Die Proben müssen zentrifugiert werden, dann wird der Überstand verworfen und das Sediment entnommen.

- Ein Tropfen des zentrifugierten Materials (Sediment) und ein Tropfen Tusche oder Nigrosin werden auf einen sauberen Objektträger gegeben.

- Es sollte gut gemischt und mit einem Deckglas abgedeckt werden, damit sich der Tropfen als dünner Film ausbreiten kann, ohne über die Ränder zu gehen.

- Anschließend wird das Präparat auf das Mikroskop montiert.

- Wenn das Präparat zu dunkel ist, kann es mit Wasser verdünnt werden.

Ausführung der Technik mit Kulturstämmen

- Ein sehr kleiner Teil einer jungen Kultur wird mit einer Impfnadel entnommen und in einem Tropfen Tusche aufgelöst, der zuvor auf einen sauberen Objektträger gegeben wurde.

- Ein Deckglas wird darauf gelegt.

- Es wird im Mikroskop bei 10X und dann bei 40X beobachtet.

Sie können auch einen Teil der Kolonie in destilliertem Wasser auflösen und von dort einen Tropfen nehmen und mit der Tusche mischen. Auf diese Weise wird das Präparat nicht so dick, so dass die Strukturen isoliert betrachtet werden können. Wenn es Menschenmassen gibt, wird es nicht gut beobachtet.

Eine andere Methode ist die folgende:

- Geben Sie einen Tropfen der Suspensionskultur auf ein Ende des Objektträgers.

- Einen Tropfen Nigrosin am selben Ende platzieren und mischen.

- Verteilen Sie die Probe mit Hilfe eines anderen Objektträgers wie einen hämatologischen Abstrich.

- Trocknen lassen und unter dem Mikroskop beobachten.

Mikroskopbeobachtung

Sie müssen sich zuerst auf ein 10-faches Objektiv konzentrieren, um eine weite Sicht auf das Feld zu haben. Anschließend sollte gesucht werden, ob freie Räume vorhanden sind; Wenn dies der Fall ist, fokussieren Sie 40X, um Details anzuzeigen.

Vorteil

- Es ist einfach auszuführen.

- Es ist eine kostengünstige Technik.

- Bei dieser Methode muss der Abstrich nicht an Hitze oder mit Chemikalien befestigt werden. Daher werden Mikroorganismen ohne Verzerrungen beobachtet.

- Das frische Präparat muss nicht getrocknet werden, sodass es sofort beobachtet werden kann und schnell zu Ergebnissen führt.

Nachteil

Nach dem Zusammenbau müssen frische Zubereitungen sofort beobachtet werden. Wenn sie trocknen dürfen, können sie nicht mehr beobachtet werden und es muss eine neue installiert werden.

Gewebefärbung mit Tusche

Eine weitere Funktion, die Tusche erfüllen kann, sind Pathologielabors. Dies wird auf chirurgisch extrahierte Gewebeproben angewendet, um die Resektionsränder des Tumors zu markieren.

Das markierte Gewebe wird mit Essigsäure besprüht. Dies wirkt als Beizmittel und verhindert, dass Tinte austritt, wenn das Gewebe einer Routineverarbeitung für die Biopsievorbereitung unterzogen wird.

Das Verfahren besteht darin, das Gewebe in Alkohol und Xylol zu baden und es dann in Paraffinwachs zu legen. Diese Markierung führt den Pathologen bei der Beobachtung des Gewebes an und zeigt an, wo sich der Rand der chirurgischen Resektion oder ein anderer Punkt von Interesse befindet.

Verweise

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