MAI GRÜNWALD-GIEMSA FÄRBEN: BEGRÜNDUNG, TECHNIK UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Die May Grünwald-Giemsa- oder Pappenheim- Färbung ist eine Differenzialfärbungstechnik, bei der Giemsa- und May Grünwald-Reagenzien gemischt werden. Es wird zur Unterscheidung normaler und abnormaler Blutzellen in peripheren Blut- und Knochenmarkabstrichen sowie zur Färbung von histologischen Schnitten und zytologischen Proben verwendet.

Beide Reagenzien - Giemsa und May Grünwald - stammen aus der Färbung vom Romanowsky-Typ, einer Technik, die auf der Kombination von sauren und basischen Farbstoffen basiert.

Abstrich mit einem segmentierten Neutrophilen und einem Milleozyten bei chronischer myeloischer Leukämie, gefärbt mit der May Grünwald Giemsa-Färbung. Dr. Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) über Wikipedia.org.

Giemsa verbesserte die Technik durch Stabilisierung der Mischung aus Eosin, Methylenblau und ihren Derivaten mit Glycerin. Stattdessen verwendet May Grünwald Eosin und Methylenblau unter Verwendung von Methanol als Lösungsmittel. Diese strategische Kombination hat zu hervorragenden Ergebnissen geführt.

Obwohl es in Bezug auf die Beobachtung der Zellmorphologie ähnlich wie die Giemsa- und Wright-Färbungen wirkt, verbessert diese Technik die vorherigen, indem die Färbung der Parasiten, die Malaria, Chagas-Krankheit, Leishmaniose und Trichomoniasis verursachen, verfeinert wird.

Darüber hinaus hat es sich als sehr nützliche Technik für die zytologische Untersuchung von Samenflüssigkeit erwiesen. Es hat sich nicht nur durch die Darstellung der morphologischen Eigenschaften von Spermien hervorgetan, sondern auch durch die effiziente Differenzierung von Leukozyten, Epithelzellen und Spermatogenesezellen.

Basis

Die Technik folgt der Grundlage von Romanowsky-Färbungen, bei denen saure Farbstoffe eine selektive Affinität zu basischen Zellkomponenten aufweisen und saure Komponenten basische Färbungen anziehen.

Auf andere Weise erklärt, haben sowohl Zellstrukturen als auch Farbstoffe positive oder negative elektrische Ladungen; wie Ladungen abstoßen und verschiedene Ladungen anziehen.

Beispielsweise sind basische Farbstoffe wie Methylenblau positiv geladen und werden von negativ geladenen Strukturen angezogen. Deshalb färbt dieser Farbstoff die Kerne, die reich an DNA und RNA sind und negativ geladene Phosphatgruppen aufweisen.

Das Granulat von segmentierten Basophilen und die Zytoplasmen von RNA-haltigen mononukleären weißen Blutkörperchen werden ebenfalls gefärbt.

Ebenso trägt der Säurefarbstoff eine negative Ladung, weshalb er an positiv geladene Strukturen wie Erythrozyten und Granulate segmentierter Eosinophiler bindet. Das Granulat segmentierter Neutrophilen fixiert beide Farbstoffe.

Vielzahl von Farbstoffen

Bei dieser Technik existiert eine Kombination von Reaktionen zwischen orthochromatischen und metachromatischen Farbstoffen. Orthochromatika (Eosin und Methylenblau) binden an die Zellstruktur, mit der sie verwandt sind, und liefern eine stabile Farbe, die nicht variiert.

Andererseits variieren die Metachromaten (die Derivate von Methylenblau-Azurblau A und Azurblau B) ihre ursprüngliche Farbe, sobald sie an die spezifische Struktur gebunden sind, und es kann sogar eine Vielzahl von Farbtönen geben.

Schließlich erfordert der Schritt, den die May Grünwald-Lösung unternimmt, die Anwesenheit von Wasser, da der Farbstoff ohne diesen die Strukturen durchdringt, sich jedoch nicht fixiert. Dazu muss der Farbstoff polar werden oder ionisieren und somit ausfallen und an verwandte Strukturen binden können.

Technik

Materialien

- Folien schieben.

- Brücken der Färbung.

- May-Grünwald-Lösung.

- Giemsa-Fleck.

- Destilliertes Wasser.

Möge Grünwald konzentrierte Lösung färben

0,25 g Eosin-Methylenblau (Färbung nach May Grünwald) müssen abgewogen und in 100 ml Methanol gelöst werden. Dann wird das Präparat 1 Stunde lang gemischt und 24 Stunden ruhen gelassen. Wenn die Zeit abgelaufen ist, wird sie gefiltert.

Um die Technik anzuwenden, muss der May Grünwald-Farbstoff wie folgt verdünnt werden: Für 200 ml verdünnten Farbstoff 30 ml der konzentrierten Lösung messen, 20 ml Pufferlösung und 150 ml destilliertes Wasser hinzufügen, eingestellt auf pH 7,2-7,3 . Später wird es gemischt und gefiltert.

Giemsa Fleckkonzentrat

0,5 g Azur-Eosin-Methylenblau (Färbung nach Giemsa) müssen gewogen, in 50 ml Methanol gelöst und 50 ml Glycerin zu der Mischung gegeben werden.

Um die Technik durchzuführen, verdünnen Sie 1:10 mit Pufferlösung und lassen Sie sie 10 Minuten ruhen. Es kann bei Bedarf gefiltert werden.

Herstellung der Pufferlösung bei pH 7,2

Sie sollten gewogen werden:

- 40 mg Kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4).

- 151 mg Dinatriumhydrogenphosphat 12-Hydrat (Na2HPO4).

Beide Verbindungen werden in 100 ml Wasser gelöst.

Verfahren zur Färbung von Blut oder Knochenmark

Es gibt zwei Modi: einen klassischen und einen schnellen.

Klassischer Modus

1. Decken Sie die Abstriche 2 bis 3 Minuten lang mit der verdünnten May-Grünwald-Lösung ab.
2. Mit gepuffertem destilliertem Wasser waschen, um die vorherige Lösung zu entfernen.
3. Mit der gleichen gepufferten Waschlösung abdecken und 1 Minute ruhen lassen. Die Idee ist, dass der vorherige Farbstoff an den Strukturen fixiert ist und gleichzeitig die Zellen hydratisiert werden.
4. 12 Tropfen verdünnte Giemsa-Tinktur in das gepufferte Wasser geben und zum Mischen und Homogenisieren blasen. 15 bis 20 Minuten ruhen lassen.
5. Abstriche mit gepuffertem destilliertem Wasser waschen und an der Luft trocknen lassen.
6. Fokussieren und betrachten Sie die gefärbten Blutzellen unter einem Lichtmikroskop mit dem 40X-Objektiv. Bei Bedarf kann der 100X verwendet werden.

Schneller Modus

1. Decken Sie den Abstrich 1 Minute lang mit verdünntem May Grünwald-Fleck ab.
2. Mit gepuffertem destilliertem Wasser waschen.
3. Mit gepuffertem Wasser abdecken und 1 Minute ruhen lassen.
4. Den verdünnten Giemsa-Fleck hinzufügen und 5 Minuten einwirken lassen.
5. Mit gepuffertem destilliertem Wasser waschen und an der Luft trocknen lassen.

Die hier beschriebenen Techniken sind eine Richtlinie, es sollte jedoch berücksichtigt werden, dass die Verfahren und Färbezeiten je nach Handelsunternehmen, das die Reagenzien vertreibt, variieren. Es ist ratsam, die von jedem Geschäftshaus streng angegebenen Schritte zu befolgen.

Technik zum Färben von Abstrichen von Samenflüssigkeit

1- Decken Sie den Abstrich 4 Minuten lang mit einer dünnen Schicht der May Grünwald-Lösung ab.

2- Entfernen Sie den Farbstoff und waschen Sie ihn mit destilliertem Wasser.

3- Legen Sie eine Schicht verdünnten Giemsa (1:10) für 15 Minuten in destilliertes Wasser.

4- Entfernen Sie den Farbstoff und waschen Sie ihn mit destilliertem Wasser.

5- Trocknen lassen und unter dem Mikroskop beobachten.

Erwartete Farben mit dem May Grünwald Giemsa Fleck

Wichtige Spezifikationen

Die Technik erfordert, dass die Reagenzien und Waschlösungen einen auf 7,2 bis 7,3 eingestellten pH-Wert aufweisen, damit die Affinitäten der Farbstoffe für die Zellstrukturen nicht verzerrt werden und die erwartete Endfarbe nicht variiert.

Anwendungen

Diese Technik wird von klinischen Labors verwendet, um periphere Blut- und Knochenmarkabstriche, Gewebeschnitte und Zytologien zu färben.

Im hämatologischen Bereich ist diese Technik von entscheidender Bedeutung für die Untersuchung von Anomalien von Zellen in Bezug auf Form, Größe und Anzahl. Es ist ein sehr wertvolles Instrument zur Diagnose bestimmter Krankheiten wie Leukämien und Anämien.

Darüber hinaus ist es von hervorragendem Nutzen bei der Suche nach Parasiten im hämatologischen (Plasmodium sp und Trypanosoma cruzi) oder histologischen (Leishmanias sp) Bereich.

Vaginale Zytologie

In Bezug auf die Vaginalzytologie ist diese Technik besonders vorteilhaft für die Beobachtung von Trichomonas vaginalis. Dies ist ein wichtiger Befund, da sein Vorhandensein Karzinom-in-situ-Bilder simuliert, die später verschwinden, wenn der Parasit beseitigt wird.

Spermaprobe

Es war ein ideales Werkzeug für die Untersuchung von Spermienproben, da es wertvolle Informationen über die Qualität der Spermien liefert.

Die angebotenen Daten haben hauptsächlich mit Anzahl und Morphologie sowie mit den möglicherweise vorhandenen und von entscheidender Bedeutung befindlichen Begleitzellen wie Keimzellen, Leukozyten und Epithelzellen zu tun.

Mit dieser Analyse ist es möglich, Anomalien zu beschreiben, die in den Spermien in Kopf, Hals, Mittelstück und Hauptstück beobachtet werden.

Darüber hinaus können sie auch dazu beitragen, Fälle von Hämospermie (Vorhandensein roter Blutkörperchen im Sperma) und Leukospermie oder Piospermie (erhöhte Anzahl von Leukozyten im Sperma) aufzuzeigen.

Verweise

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