KINYOUN-FÄRBUNG: BEGRÜNDUNG UND TECHNIKEN - BIOLOGIE - 2025

Die Kinyoun-Färbung ist eine Färbetechnik, mit der Bakterien und Parasiten resistent gegen sauren Alkohol gefärbt werden. Es wurde aus der Modifikation der Ziehl-Neelsen-Färbung geboren; Beide Techniken werden gleich interpretiert, unterscheiden sich jedoch in zwei Elementen: bei der Herstellung des Hauptreagenz und bei der Kinyoun-Technik wird keine Wärme verwendet.

Aus diesem Grund wird es auch als kaltmodifizierter Ziehl-Neelsen- oder Kinyoun-Kaltfleck bezeichnet. Es ist angezeigt für die Färbung von Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypischen Mycobakterien, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris und Cyclosporas cayetanensis.

Mit Kinyoun-Färbung gefärbtes Cryptosporidium parvum. Punlop Anusonpornperm von Wikimedia Commons

Es ist erwähnenswert, dass Nocardia mit dieser Technik schwach färbt, da sie teilweise säurealkoholresistent sind. Daher gibt es für diese Gattung eine Modifikation der Methodik.

Die kalte Kinyoun-Technik wurde wiederum mit der von Didier modifizierten Trichrom-Technik zum Nachweis von Coccidia- (Cryptosporidium parvum und Isospora belli) und Mikrosporidium-Sporen (Enterocytozoon bieneusi und Encephalitozoon intestinalis) kombiniert.

Basis

Das Hauptfärbungsreagenz ist Carbolfuchsin oder Carbolfuchsin, das die Eigenschaft hat, an Carbolsäuren zu binden, die in der lipidreichen wachsartigen Zellwand (Mykolsäuren) von Mykobakterien und bestimmten Parasiten vorhanden sind.

Dieser Bindung wird durch das Säurebleichmittel nicht entgegengewirkt; Daher werden Mikroorganismen als säurefest definiert.

Im Gegensatz zur Ziehl-Neelsen-Technik, die den Farbstoff durch Hitze fixiert, ist dieser Schritt bei der Kinyoun-Technik nicht erforderlich, da die für diese Technik hergestellte Carbol-Fuchsin-Lösung eine hohe Phenolkonzentration enthält.

Phenol löst das Lipidmaterial in der Zellwand auf und lässt den Carbolfuchsin-Farbstoff eintreten. Nachdem der Farbstoff eingedrungen ist, bleibt er trotz des Waschens mit saurem Alkohol fixiert.

Auf diese Weise nehmen die säurefesten Mikroorganismen die charakteristische rote Farbe an, während sich alles, was nicht säurefest ist, verfärbt und blau färbt.

Technik

Materialien

- Modifiziertes Carbolfuchsin.

- Alkoholsäure.

- Methylenblau.

Herstellung von Kinyoun Carbol Fuchsin

- Grundfuchsin: 4 gr.

- Phenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destilliertes Wasser: 100 ml.

Das basische Fuchsin sollte langsam unter ständigem Mischen im Alkohol gelöst werden. Anschließend wird das kristallisierte Phenol in einem Wasserbad bei 56 ° C geschmolzen. Nach dem Auflösen werden 8 ml zu der oben hergestellten Fuchsinlösung gegeben.

Herstellung des Säure-Alkohols

- Konzentrierte Salzsäure: 3 ml.

- Ethanol (95%): 97 ml.

Es muss gemessen, verbunden und gemischt werden.

Herstellung des Methylenblau-Kontrastfarbstoffs

- Methylenblau: 0,3 g.

- Destilliertes Wasser: 100 ml.

Es wird gewogen und aufgelöst.

Kinyoun-Färbetechnik

1- Bereiten Sie einen Abstrich direkt aus der Probe vor, der unter anderem Sputum, Lungenflüssigkeit, Urinsediment, Liquor cerebrospinalis oder Kot sein kann. oder aus einer Suspension von Mikroorganismen, die aus reinen Kolonien erhalten wurden, die in Primärkulturmedien entwickelt wurden.

2- Fixieren Sie den Abstrich mit Hitze.

3- Legen Sie den Abstrich auf die Färbebrücke und bedecken Sie ihn mit dem vorbereiteten Kinyoun-Carbol-Fuchsin-Reagenz. 3 bis 5 Minuten ruhen lassen.

4- Mit destilliertem Wasser waschen.

5- 3 Minuten mit saurem Alkohol bleichen und erneut mit destilliertem Wasser waschen.

6- Bleichen Sie erneut 1 oder 2 Minuten lang mit saurem Alkohol, bis keine Färbung mehr vorhanden ist.

7- Mit destilliertem Wasser waschen und abtropfen lassen, wobei der Objektträger in eine vertikale Position gebracht wird.

8- Decken Sie das Präparat mit Methylenblau ab und lassen Sie es 4 Minuten einwirken.

9- Mit destilliertem Wasser waschen und an der Luft trocknen lassen.

10- Untersuchen Sie bei 40X und dann bei 100X.

Um die Färbung säurefester Mikroorganismen zu verbessern und zu beschleunigen, geben Sie 1 Tropfen eines Netzmittels (wie Tergitol Nr. 7) zu 30 oder 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Einige Labore ändern den Methylenblau-Kontrastfarbstoff in hellgrün oder Pikrinsäure. Der erste gibt dem Hintergrund eine grüne Farbe und der zweite eine gelbe Farbe.

Spezielle Kinyoun-Technik für Nocardien

Um die Färbung von Bakterien der Gattung Nocardia zu verbessern, wird eine Modifikation der Kinyoun-Färbung verwendet. Die Technik ist wie folgt:

1- Decken Sie den Abstrich 3 Minuten lang mit Kinyoun Carbol Fuchsin ab.

2- Mit destilliertem Wasser waschen.

3- Mit 3% igem saurem Alkohol kurz verfärben, bis keine Färbung mehr vorhanden ist.

4- Nochmals mit destilliertem Wasser waschen.

5- Decken Sie das Präparat mit Methylenblau ab und lassen Sie es 30 Sekunden lang einwirken.

6- Mit destilliertem Wasser waschen und an der Luft trocknen lassen.

Von Didier modifizierte kombinierte Carbol-Fuchsin- und Trichrom-Technik

Diese Technik wird für die gleichzeitige Analyse von Stuhlproben auf Coccidia- und Microsporidium sp-Sporen empfohlen. Das folgende Verfahren ist wie folgt:

1- Decken Sie den Abstrich 10 Minuten lang mit Kinyoun Carbol Fuchsin ab.

2- Entfernen Sie den Farbstoff und waschen Sie ihn mit destilliertem Wasser.

3- 30 Sekunden mit Salzsäurealkohol bleichen.

4- Nochmals mit destilliertem Wasser waschen.

5- Decken Sie den Abstrich 30 Minuten lang bei 37 ° C mit Trichromlösung ab.

6- Mit destilliertem Wasser waschen.

7- 10 Sekunden mit Essigsäurealkohol bleichen.

8- Waschen Sie den Abstrich 30 Sekunden lang mit 95% Ethanol.

QA

Als positive Kontrolle werden Abstriche mit Mycobacterium tuberculosis-Stämmen hergestellt und mit den Reagenzien angefärbt, die hergestellt wurden, um zu überprüfen, ob die Bakterien die geeignete Farbe annehmen (Rot-Fuchsie).

Negativkontrollen können auch verwendet werden, indem Abstriche mit einem anderen Stamm als saurem Alkohol schnell hergestellt werden, wodurch überprüft wird, ob die gesamte Probe die Kontrastfarbe annimmt.

Kinyoun-Technik im Vergleich zur Ziehl-Neelsen-Technik

Die Kinyoun-Technik ist einfacher, da sie den Erwärmungsschritt eliminiert. Ihr Hauptvorteil besteht jedoch darin, dass die Emission von hochgiftigen und krebserregenden Dämpfen langfristig vermieden wird. Daher ist der Kinyoun-Fleck sicherer für das Färben von Personal.

Es ist wichtig zu berücksichtigen, dass darauf geachtet werden muss, dass die Reagenzien nicht in direkten Kontakt mit der Haut kommen, da sie ätzend sind und das Bleichmittel entflammbar ist.

Was die Nachteile betrifft, bedeutet ein negativer Abstrich nicht unbedingt, dass der Organismus nicht vorhanden ist. Darüber hinaus kann das Vorhandensein von Zelltrümmern zu falsch positiven Ergebnissen führen, was zu Verwirrung bei der Diagnose führt.

Referenz

1. Angewandte klinische Chemie. (2016). BK Kinyoun Kit.Verfügbar unter: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun-Färbung und zwei Coccidia bei HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
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5. Wikipedia-Mitwirkende. "Kinyoun Fleck." Wikipedia, die freie Enzyklopädie. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8. Februar 2018. Web. 5. Januar 2019.
6. Combol A, Fernández N., Figueredo E., Acuña A., Zanetta E. Implementierung einer Färbetechnik zur gleichzeitigen Diagnose von Coccidia und Microsporidia. Institut für Hygiene der Universität der Republik. Montevideo. Uruguay. Verfügbar unter: hygiene.edu.uy