KAPSELFÄRBUNG: BEGRÜNDUNG UND TECHNIKEN - BIOLOGIE - 2025

Die Färbekapsel ist eine differentielle Färbetechnik, die die Eigenschaft einer Stresspolysaccharidstruktur aufweist, die bestimmte Bakterien und Hefen umgibt, die als Kapsel bezeichnet werden. Es wird in klinischen Labors verwendet, um bestimmte Pathologien zu diagnostizieren, die durch eingekapselte Mikroorganismen verursacht werden.

Es wird auch in Lehrlabors zur Demonstration dieser morphologischen Struktur für Studenten gesundheitswissenschaftlicher Berufe verwendet, z. B. Medizin, Bioanalyse, Krankenpflege oder Zytotechnologie.

Klebsiella pneumoniae-Abstrich mit Kapselfärbung gefärbt. Tusche-Methode mit Safranin. Quelle: А.А.В

Es gibt verschiedene einfache Techniken, um das Vorhandensein der Kapsel in den Mikroorganismen zu demonstrieren, die sie besitzen. Dies sind: die negative Färbung, die Anthony-Färbung und eine Variante, die die beiden vorherigen kombiniert.

Eine negative Färbung wird hauptsächlich in CSF-Proben verwendet, wenn das Vorhandensein der Hefe Cryptococcus neoformans vermutet wird. Diese Hefe ist eine häufige Ursache für Meningitis.

Diese Technik verwendet Nigrosin oder Tusche und basiert auf der Schaffung eines Kontrasts zwischen dem Hintergrund des Präparats und der undurchdringlichen Kapsel des Mikroorganismus. Der Hintergrund wird dunkel und die Kapsel ist farblos. Auf diese Weise wird diese Struktur aufgedeckt.

In Bezug auf die Anthony-Technik kann gesagt werden, dass sie hauptsächlich in Lehrlabors verwendet wird, um die Polysaccharidstruktur in Bakterien wie Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae und Neisseria meningitidis nachzuweisen.

Die Verwendung dieser Technik für diagnostische Zwecke ist sehr selten, da es andere Routinetests gibt, die die Identifizierung dieser Mikroorganismen ermöglichen.

Basis

Die Kapsel ist eine starke Struktur von Polysaccharidcharakter. Dies schützt die Mikroorganismen vor Phagozytose und ist daher eine schwer zu durchdringende Struktur.

Deshalb basieren Kapselflecken auf Kontrast. Die Farbstoffe färben den Boden der Zubereitung, während die Kapsel farblos bleibt.

Daher ist mit diesen Techniken die Kapsel leicht erkennbar. Wenn der Mikroorganismus keine Kapsel hat, ist er mit dieser Art der Färbung nicht unterscheidbar, da alles in der gleichen Farbe gefärbt wird.

Alle Techniken, die zum Färben der Kapsel verwendet werden, haben trotz unterschiedlicher Farbstoffe und Verfahren das gleiche Grundprinzip.

Techniken par

-Anthony Fleck

Anthonys Fleck verwendet Kristallviolett als Fleck. Dies färbt den Bakterienkörper und den Hintergrund lila.

Andererseits wird 20% Kupfersulfat verwendet. Dies dient als Waschlösung, dh es entfernt überschüssigen violetten Kristall aus der Zubereitung, wodurch die Kapseln klar werden, ohne dass der Bakterienkörper oder der Hintergrund Farbe verlieren.

Materialien

- Schillernde Milch.

- Rutschen.

- 1% violetter Kristall.

- 20% Kupfersulfat.

- Optisches Mikroskop.

- Tauchöl.

Prozess

Diese Technik besteht aus:

1. Kultivieren Sie den Mikroorganismus 36 Stunden lang in schillernder Milch.
2. Platzieren Sie einen Tropfen der Kultur am Ende eines Objektträgers und daneben einen Tropfen violettes Glas, mischen Sie ihn und verteilen Sie ihn mit dem Ende eines anderen Objektträgers.
3. Lufttrocknen und nicht erhitzen.
4. Mit 20% iger Kupfersulfatlösung waschen, an der Luft trocknen lassen.
5. Unter einem Mikroskop mit einem Tauchobjektiv beobachten. Suchen Sie nach den Enden der Ausbreitung.

Es ist wichtig, keine Wärme zum Fixieren oder Trocknen zu verwenden, da dies die Kapsel beschädigt. Auch nicht mit Wasser waschen.

Deutung

Schillernde Milch ist ein ausgezeichnetes Kulturmedium, da sie die notwendigen Nährstoffe liefert, damit der Mikroorganismus eine herausragende Kapsel entwickeln kann.

Andererseits bildet die schillernde Milch einen dicken und kompakten Boden, der zusammen mit dem Bakterienkörper lila gefärbt wird, aber die Kapsel, die den Mikroorganismus umgibt, bleibt farblos. Daher wird ein klarer Lichthof um den Bakterienkörper beobachtet.

Grafische Darstellung zur mikroskopischen Beobachtung eines mit Anthonys Färbung gefärbten Klebsiella pneumoniae-Abstrichs. Quelle: Hergestellt vom Autor MSc. Marielsa Gil.

Vorteil

Es ist eine einfache Technik durchzuführen. Muss nicht repariert werden.

Es sollte auch beachtet werden, dass andere Kulturmedien verwendet werden können, aber das Milchmedium wird bevorzugt, weil es den Vorteil hat, prominentere Kapseln bereitzustellen.

Nachteile

Es ist eine etwas arbeitsintensivere Technik als die Negativfärbung, und für die Visualisierung muss gewartet werden, bis das Präparat vollständig getrocknet ist.

-Negative Färbung

Materialien

- Folien schieben.

- Kulturmedium mit dem Mikroorganismus.

- Chinesische Tinte oder Nigrosin.

- Optisches Mikroskop.

- Physiologische Kochsalzlösung.

Prozess

Geben Sie einen Tropfen physiologische Kochsalzlösung auf das Deckglas und lösen Sie einen kleinen Teil der mikrobiellen Kultur auf. Es ist wichtig, dass das Präparat nicht zu dick ist. Dann einen Tropfen chinesische Tinte oder Nigrosin geben und mischen.

Ein Deckglas wird dann über die Zubereitung gelegt, ohne dass die Flüssigkeit überläuft. Es wird unter dem Mikroskop beobachtet, indem zuerst auf ein 10-fach Objektiv fokussiert und dann auf 40-fach bewegt wird.

Diese Technik kann auch direkt bei CSF-Proben angewendet werden. Das heißt, anstatt einen Tropfen mikrobieller Kultur zu platzieren, wird ein Tropfen CSF platziert.

Vorteil

Es ist eine einfache Methode durchzuführen und gleichzeitig kostengünstig. Es erfordert keine Fixierung oder Trocknung des Präparats.

Nachteile

Der Nachteil ist, dass es vor dem Trocknen des Präparats unter einem Mikroskop beobachtet werden muss, da sich in diesem Fall die Mikroorganismen zusammenziehen, was die Visualisierung erschwert.

Andererseits können falsch positive Ergebnisse auftreten, wenn der Analytiker unerfahren ist, da Leukozyten häufig mit Hefen verwechselt werden.

Die Beobachtung von Hefekapseln mit der chinesischen Tinten- oder Nigrosin-Technik sollte als vermutliche Diagnose von Cryptococcus neoformans angesehen werden, bis dies mit der Kultur nachgewiesen wird.

Dies liegt daran, dass es andere Hefen gibt, die die Ursache für Meningitis sein könnten, und nicht nur Cryptococcus neoformans, wie die der Gattungen Candida und Rhodotorula, sowie andere Arten von Cryptococcus.

Deutung

Wenn es eingekapselte Mikroorganismen gibt, wird ein dunkler Hintergrund beobachtet, wobei transparente Körper in der Flüssigkeit schweben, was das Vorhandensein der Kapsel hervorhebt.

Cryptococcus neoformans Kapsel mit chinesischer Tinte gefärbt. Quelle: Bildnachweis: Inhaltsanbieter: CDC / Dr. Leanor Haley

-Indian Tintentechnik

Diese Technik kann auch mit Nigrosin durchgeführt werden. Es ist eine Kombination der zuvor erläuterten Techniken. Diese Technik verwendet Kristallviolett und Tusche oder Nigrosin.

Der Bakterienkörper wird vom Kristallviolett lila, weil er negativ geladen ist, während Nigrosin den Boden des Abstrichs färbt. Wenn das Bakterium eine Kapsel hat, erscheint sie als transparenter Lichthof um den Mikroorganismus.

Das Kristallviolett kann durch eine dieser Farben ersetzt werden: Safranin, basisches Fuchsin oder Methylenblau.

Materialien

- Violettes Glas.

- Nigrosin oder Tusche.

- Folien schieben.

- Mikroskop.

Prozess

- Kultivieren Sie den Mikroorganismus in einem Kulturmedium.

- Geben Sie einen Tropfen der Kultur auf das Ende eines Objektträgers und daneben einen Tropfen Tusche oder Nigrosinkristall, mischen Sie ihn und verteilen Sie ihn mit dem Ende eines anderen Objektträgers.

- An der Luft trocknen und nicht an der Hitze befestigen.

- 1 Minute mit einer violetten Kristalllösung abdecken, mit destilliertem Wasser aber sehr fein waschen (weicher Strahl), an der frischen Luft trocknen lassen.

- Mit einem Tauchobjektiv unter dem Mikroskop beobachten. Suchen Sie nach den Enden der Ausbreitung.

Deutung

Ein lila Bakterienkörper und ein dunkler Hintergrund werden gesehen. Die Kapsel erscheint, falls vorhanden, um die Bakterien herum farblos.

Verweise

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