Der Wismutsulfit-Agar ist eine feste mittelselektive und differenzielle Kultur, die speziell für die Isolierung der Salmonella enterica-Unterart enterica Serotyp Typhi unter anderen Salmonellenarten formuliert wurde. Das Medium ist als BSA-Agar für sein Akronym im englischen Wismutsulfit-Agar bekannt.
Die ursprüngliche Formel für Wismutsulfit-Agar wurde 1927 von Wilson und Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium) entwickelt. es enthielt Natriumsulfit, Glucose, Wismutlösung, Ammoniumcitrat, Eisensulfat und Agar-Agar.
Wachstum von 48 Stunden Inkubation von Salmonella sp auf Wismutsulfitagar. Quelle: Pixnio.com Autor: Dr. WR Erving, USCDCP
Heute gibt es eine Modifikation des ursprünglichen Mediums, bestehend aus Fleischextrakt, Fleisch- und Kaseinpeptonen, Wismutsulfitindikator, Glucose, Dinatriumphosphat, Eisensulfat, Hellgrün und Agar-Agar.
Es gibt viele Mittel zur Isolierung von Salmonella-Arten, aber wenn es um die Gewinnung des Typhi-Serotyps geht, hat Wismutsulfit-Agar einen bemerkenswerten Vorteil gegenüber diesen, da in den meisten Fällen eine sehr geringe oder keine Gewinnung dieses Mikroorganismus erzielt wird .
Es ist jedoch notwendig, mehr als eine Art von Medium zu verwenden, wenn versucht wird, Enteropathogene zu isolieren, da Wismutsulfit-Agar für andere Salmonellenarten und für die Gattung Shigella, die gehemmt sind oder sich sehr schlecht entwickeln, weniger wirksam ist. in diesem Agar.
Es ist zu beachten, dass der Typhi-Serotyp von allen Salmonella-Arten eines der wichtigsten Enteropathogene beim Menschen ist und dies sein einziges Reservoir ist. Dieser Serovar verursacht Typhus, Gastroenteritis, Bakteriämie und Septikämie.
Aus diesem Grund ist es wichtig, diesen Agar bei der Analyse von Wasser, Kot oder Lebensmittelproben einzubeziehen, wenn der Verdacht auf Vorhandensein besteht.
Basis
Wie die meisten Kulturmedien enthält Wismutsulfitagar Nährstoffe zur Förderung des Bakterienwachstums wie Peptonen und Fleischextrakt. Ebenso fungiert Glukose als Energie- und Kohlenstoffquelle.
Auf diesem Medium wachsen jedoch nicht alle Bakterien, da Wismutsulfitagar ein selektives Medium ist. Es enthält Verbindungen, die das Wachstum von grampositiven Mikroorganismen und bestimmten gramnegativen Bakterien hemmen. Diese Verbindungen sind: der Indikator Wismutsulfit und hellgrün.
Dinatriumphosphat seinerseits behält die Osmolarität und den pH-Wert des Mediums bei.
Zusätzlich ist Wismutsulfit-Agar dank der Anwesenheit von Eisensulfat ein Differenzmedium, das die Bildung von H 2 S zeigt. Das von Bakterien gebildete H 2 S reagiert mit Eisensulfat und bildet einen deutlich sichtbaren unlöslichen schwarzen Niederschlag.
Schließlich verleiht der Agar-Agar dem Medium die feste Konsistenz.
Vorbereitung
52,3 g des dehydrierten Mediums werden abgewogen und in einem Liter Wasser gelöst. Erhitze die Mischung unter häufigem Rühren 1 Minute lang zum Kochen, bis sie sich vollständig aufgelöst hat. Überhitzen Sie nicht zu stark. Dieses Medium ist nicht autoklavierbar, da extreme Hitze das Kulturmedium schädigt.
Vor dem Servieren in sterilen Petrischalen auf 45 ° C abkühlen lassen und schütteln. Es wird empfohlen, Platten mit guter Dicke herzustellen. Dazu müssen 25 ml in jede Platte gegossen werden. Erstarren lassen. Da es sich um ein Medium handelt, das nicht sterilisiert ist, wird normalerweise die sofortige Verwendung empfohlen.
Eine 1977 von D'aoust durchgeführte Studie zeigte jedoch, dass Salmonella typhimurium und Salmonella enteritidis mit zunehmendem Alter des Wismutsulfit-Agars besser wiedergewonnen werden können, ohne die Leistung der Serovare Typhi und Paratyphi B zu beeinträchtigen.
D'aoust empfiehlt die Verwendung der Platten am 4. Tag der Kühlung, warnt jedoch davor, dass mit zunehmendem Alter die Selektivität abnimmt und sich Proteus vulgaris-Stämme leichter entwickeln.
Aus diesem Grund ist es für stark kontaminierte Proben wie Kot vorzuziehen, frisch zubereitetes Medium zu verwenden. Andernfalls am 4. Tag der Zubereitung verwenden. Andere Autoren empfehlen, die Teller am Tag nach ihrer Zubereitung im Kühlschrank zu lagern.
Gekühlte Teller müssen vor Gebrauch temperiert werden. Der pH-Wert des Mediums sollte 7,5 ± 0,2 betragen. Das Rohmedium ist beige und das vorbereitete Medium ist grünlich-grau opaleszierend.
Anwendungen
Zu den Proben, die in dieses Medium gepflanzt werden können, gehören Proben von Kot, Trink- oder Abwasser und Lebensmitteln.
Um die Isolate zu verbessern, wird empfohlen, vor der Aussaat auf Wismutsulfit-Agar eine Voranreicherungsbehandlung mit Lactose-Bouillon und nach der Anreicherung mit Tetrathionat-Bouillon oder Cystin-Selenit-Bouillon durchzuführen.
Die Platten werden 24 bis 48 Stunden bei 35 ° C ± 0,2 in Aerobiose inkubiert.
Eigenschaften der Kolonien auf Wismutsulfitagar
Salmonella Typhi-Kolonien sind typischerweise innerhalb von 24 Stunden auf diesem Agar mit einem schwarzen Zentrum zu sehen und von einem hellgrünen Heiligenschein umgeben. Während sie in 48 Stunden aufgrund der Bildung von Schwefelwasserstoff vollständig schwarz werden.
-Dieses Medium hemmt die meisten Arten der Gattung Shigella.
- S. Typhi und S. arizonae können sehr ähnliche Kolonien ergeben.
-Die Coliformen, die H 2 S produzieren, wie Proteus und Citrobacter, produzieren Kolonien, die denen von Salmonellen ähnlich sind. Daher müssen biochemische Identifizierungstests durchgeführt werden.
- Eine gute Streifenbildung muss durchgeführt werden, um isolierte Kolonien zu erhalten. Nur so können die typischen Merkmale von Kolonien der Gattung Salmonella beobachtet werden.
QA
Für die Sterilitätskontrolle wird eine nicht inokulierte Platte bei 37 ° C inkubiert, es wird erwartet, dass es kein Wachstum oder keine Farbänderung gibt.
Zur Qualitätskontrolle sind bekannte Stämme wie:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Es wird erwartet, dass Escherichia coli und Shigella flexneri durch die Entwicklung von grünlich-braunen bzw. braunen Kolonien teilweise gehemmt werden. Während beide Salmonellen eine hervorragende Entwicklung mit schwarzen Kolonien mit metallischem Glanz aufweisen müssen, muss Enterococcus faecalis schließlich vollständig gehemmt werden.
Verweise
- Wilson, W. & EM McV. Blair. Verwendung eines Glucose-Wismutsulfit-Eisenmediums zur Isolierung von B. typhosus und B. proteus. Das Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374 & ndash; 391. Abgerufen von .jstor.org
- D'aoust JY. Einfluss der Lagerbedingungen auf die Leistung von Wismutsulfit-Agar. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Verfügbar in: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD Laboratories. Wismutsulfit-Agar nach WILSON-BLAIR. 2009.Verfügbar unter: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Himedia Laboratories. Wismutsulfit-Agar. 2017. Verfügbar unter: himedialabs.com
- Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiologische Diagnose. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentinien.
- Morales R., de la Cruz D., Leyva G. und Ybarra M. Bakteriologische Qualität der in Miravalles, Puebla, hergestellten rohen Ziegenmilch. Rev. Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54