CLED AGAR: BEGRÜNDUNG, VERWENDUNG UND VORBEREITUNG - BIOLOGIE - 2025

Der CLED-Agar (Cystin-Lactose-Elektrolyt-Mangel) ist ein festes Kulturmedium-Differential, das zur Diagnose von Harnwegsinfektionen verwendet wird. Die Zusammensetzung des Kulturmediums ist für das gute Wachstum von Harnpathogenen ausgelegt und ideal für die Quantifizierung von koloniebildenden Einheiten (KBE).

Das CLED-Kulturmedium ist nicht selektiv, da gramnegative und grampositive Mikroorganismen darin wachsen können. Dies ist jedoch kein Problem, da die meisten HWI nur von einer Art von Mikroorganismen verursacht werden.

CLED-Agar

Bei polymikrobiellen Infektionen können 2 oder 3 verschiedene Bakterien gewonnen werden, dies ist jedoch sehr selten und meistens handelt es sich um kontaminierte Proben.

Unter den gramnegativen Bakterien, die in diesem Medium wachsen können, befinden sich die Bazillen der Familie der Enterobacteriaceae und andere enterische Bazillen. Die in Urinproben am häufigsten isolierten Uropathogene sind: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Unter anderem Pseudomonas aeruginosa.

Ebenso können unter den grampositiven Bakterien, die in diesem Medium wachsen können, Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp und sogar Hefen wie der Candida albicans-Komplex wachsen.

Aufgrund der chemischen Zusammensetzung des Mediums erlaubt es jedoch nicht das Wachstum einiger anspruchsvoller Urogenitalpathogene wie Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis ua.

CLED Agar Begründung

Das CLED-Kulturmedium enthält Fleischextrakt, Pankreashydrolysat von Casein und Hydrolysat von Gelatine als Energiequelle. Sie liefern die Nährstoffe für die Entwicklung anspruchsloser Bakterien.

Es enthält auch Cystin, eine Aminosäure, die das Wachstum von Coliformen ermöglicht, die sich durch ihre geringe Größe auszeichnen.

Ebenso enthält es Laktose als fermentierbares Kohlenhydrat, aus diesem Grund ist dieses Medium unterschiedlich; in der Lage sein, die fermentierenden Bakterien von der nicht laktosegärenden zu unterscheiden.

Fermentierende Bakterien bewirken, dass sich der pH-Wert des Mediums durch die Produktion von Säuren ändert und sich gelbe Kolonien entwickeln, während nicht fermentierende Bakterien keine Veränderungen im Medium erzeugen und daher die Farbe des ursprünglichen Agars Grün annehmen.

Die Fermentationsreaktion wird durch das Vorhandensein des pH-Indikators sichtbar, der in diesem Medium Bromthymolblau ist.

Andererseits hemmt die niedrige Elektrolytkonzentration des Mediums das typische invasive Wachstum der Gattung Proteus, den sogenannten Schwarmeffekt. Dies erzeugt einen Vorteil gegenüber anderen Medien, da es das Zählen von KBE ermöglicht, auch wenn die Gattung Proteus vorhanden ist.

Die geringe Konzentration an Elektrolyten hemmt jedoch das Wachstum einiger Arten der Gattung Shigella, was im Vergleich zu anderen Medien ein Nachteil ist.

Begründung für CLED-Agar (Bevis)

Es gibt eine Variante oder Modifikation dieses Mediums von Bevis, der saures Fuchsin (Andrades Indikator) in die ursprüngliche Zusammensetzung eingearbeitet hat. Es wirkt in Verbindung mit Bromthymolblau, um die Fermentation von nicht fermentierenden Bakterien zu unterscheiden.

Der Unterschied zwischen herkömmlichem und modifiziertem Medium ist die Farbe, die die Kolonien annehmen. Bei laktosefermentierenden Bakterien färben sich die Kolonien rot-orange mit einem rosa oder roten Lichthof, während die nicht fermentierenden bläulich-grau sind.

Anwendungen

CLED-Agar wird ausschließlich zur Aussaat von Urinproben verwendet. Die Verwendung dieses Mediums ist in europäischen Laboratorien besonders häufig, während es in Amerika weniger häufig verwendet wird.

Die Probenentnahme muss bestimmte Parameter erfüllen, um zuverlässige Ergebnisse zu erhalten, darunter:

• Nehmen Sie vor der Probenahme keine Antibiotika ein.
• Nehmen Sie den Urin vorzugsweise morgens als erstes ein, da er konzentrierter ist, wenn es nicht möglich ist, die Probe mit invasiven Methoden zu entnehmen.
• Waschen Sie die Genitalien gut, bevor Sie die Probe entnehmen.
• Entsorgen Sie den ersten Urinstrahl und stellen Sie den Behälter ab.
• Sammeln Sie 25 bis 30 ml Urin in einem gut etikettierten sterilen Behälter.
• Sofort ins Labor gehen, umgeben von Eis.
• Es muss innerhalb von 2 Stunden nach der Ausgabe verarbeitet oder maximal 24 Stunden bei 4 ° C gekühlt werden.

Urinproben aussäen

Die Urinprobe sollte 1:50 verdünnt werden.

Zur Verdünnung 0,5 ml Patientenurin einfüllen und mit 24,5 ml steriler physiologischer Lösung verdünnen.

Messen Sie 0,1 ml des verdünnten Urins und der Oberfläche mit einem Drigalski-Spatel auf dem CLED-Medium ab. Dies ist die beste Aussaatmethode zum Zählen von Kolonien. Aus diesem Grund wird es in Urinproben verwendet, da die Ergebnisse in KBE / ml angegeben werden müssen.

Um die erhaltenen Kolonien zu quantifizieren, gehen Sie wie folgt vor: Zählen Sie die Kolonien auf der Platte und multiplizieren Sie sie mit 10 und dann mit 50. Dies gibt Ihnen die Menge an KBE / ml Urin.

Deutung

Zählt über 100.000 KBE / ml - Zeigt eine Harnwegsinfektion an

Zählt unter 1000 KBE / ml - Keine Infektion

Zählt zwischen 1000-10.000 KBE / ml - Zweifelhafte, mögliche Kontamination, wiederholte Probenahme.

ICH WÜRDE

Die auf CLED-Agar gezüchteten Kolonien sollten ein Gramm haben, und abhängig von den morphotintoriellen Eigenschaften des Mikroorganismus wird eine bestimmte Subkultur durchgeführt.

Wenn es sich beispielsweise um einen gramnegativen Bazillus handelt, wird er auf einen MacConkey-Agar gesät, auf dem die Fermentation von Laktose bestätigt wird oder nicht. Zusätzlich wird ein Nähragar angebracht, um den Oxidasetest durchzuführen.

Falls das Gram grampositive Kokken zeigt, kann es auf salzigem Mannitagar und auf Nähragar subkultiviert werden. In letzterem wird der Katalasetest durchgeführt. Wenn Hefen beobachtet werden, werden sie schließlich auf Sabouraud-Agar ausgesät.

Viele Labors vermeiden die Verwendung von CLED-Medium und bevorzugen die Verwendung von Blutagar, MacConkey und Nähragar zum Aussäen von Urinproben.

Vorbereitung

In einem Kolben mit einem Liter destilliertem Wasser werden 36,2 g CLED-Agarpulver gelöst. Nach 5 Minuten Stehenlassen den resuspendierten Agar erhitzen und unter ständigem Mischen 1 Minute lang kochen lassen.

Dann 15 Minuten bei 121 ° C im Autoklaven sterilisieren. Am Ende der Zeit wird es aus dem Autoklaven entfernt und auf eine Temperatur von 45 ° C abkühlen gelassen. Anschließend werden in jeder sterilen Petrischale 15-20 ml serviert.

Das Servieren der Platte muss in einer Laminar-Flow-Haube oder vor dem Bunsenbrenner durchgeführt werden, um eine Kontamination zu vermeiden.

Die servierten Platten werden erstarren gelassen, in einem umgekehrten Gestell angeordnet und bis zur Verwendung in einem Kühlschrank (2-8 ° C) aufbewahrt.

Der endgültige pH-Wert des hergestellten Mediums sollte 7,3 ± 0,2 betragen.

Verweise

1. Empfehlungen für die mikrobiologische Diagnose einer Harnwegsinfektion. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Verfügbar unter: scielo.org.
2. Panchi J. Identifizierung des mikrobiellen Mittels, das bei stationären Patienten, die sich einer Blasenkatheterisierung unterziehen, Harnwegsinfektionen verursacht. 2016. Undergraduate-Arbeit, um sich für den Bachelor-Abschluss in Clinical Laboratory zu qualifizieren. Technische Universität Ambato. Ecuador.
3. Britannia Laboratories. CLED-Medium. Verfügbar unter: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Gebrauchsanweisung, CLED Agar. 2013 Verfügbar unter: es.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories. Grundhandbuch der Mikrobiologie. Verfügbar unter: ictsl.net.
6. Muñoz P., Cercenado E., Rodríguez-Créixems M., Díaz MD, Vicente T., Bouza E. Die CLED-Agar-Option in der Urinkulturroutine. Eine prospektive und vergleichende Bewertung. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287 & ndash; 90.
7. García P., Paredes F., Fernández del Barrio M. (1994). Praktische klinische Mikrobiologie. Universität Cadiz, 2. Auflage. UCA Publications Service.