SCHOKOLADENAGAR: BASIS, VERWENDUNG UND ZUBEREITUNG - BIOLOGIE - 2025

Der Schokoladenagar ist ein festes Kulturmedium, angereichert, nicht selektiv und nicht differentiell. Es wird hauptsächlich zur Isolierung von Mikroorganismen verwendet, die aus ernährungsphysiologischer Sicht anspruchsvoll sind, obwohl darin jede Art von Bakterien wachsen kann.

Aus diesem Grund nimmt seine Nützlichkeit insbesondere bei der Aussaat von normalerweise sterilen Proben wie Liquor und Gelenkflüssigkeit zu. Es ist zwar auch in den gewählten Mitteln zur Aussaat polymikrobieller Proben enthalten, in diesen Fällen ist es jedoch erforderlich, Antibiotika hinzuzufügen, die die begleitende Flora hemmen.

Schokoladenagar mit Bakterienwachstum

Dieses Medium hat eine charakteristische braune Farbe, die der Schokolade sehr ähnlich ist, daher der Name. Das Präparat ist dem von Blutagar sehr ähnlich, nur in diesem Fall muss das Blut erhitzt werden, damit die roten Blutkörperchen abgebaut werden.

Seine Herstellung ist wie Blutagar sehr empfindlich, da es leicht kontaminiert wird. Aus diesem Grund bevorzugen viele Labors den Erwerb dieses Mediums, das bereits von kommerziellen Unternehmen hergestellt wurde, die seine Qualität garantieren.

Basis

Dieses Medium besteht aus einer nährstoffreichen Agarbasis und erhitztem Blut. Die Hämolyse roter Blutkörperchen liefert Faktor X (Hämin) und Faktor V (NAD), die für das Wachstum einiger Mikroorganismen wie der Gattung Haemophilus erforderlich sind. Es ist auch sehr nützlich für die Isolierung von Neisserias sp.

Wie bei Blutagar können je nach Bedarf unterschiedliche Medien als Basisagar verwendet werden. Unter den verwendeten Medien sind Gehirnherzinfusion und Trypticase-Soja-Agar, obwohl die am meisten empfohlenen Columbia-Agar, Müeller Hinton, GC-Agar und Thayer-Martin-Agar sind.

Einige Varianten von Schokoladenagar enthalten eine im Handel erhältliche angereicherte Ergänzung namens Isovitalex oder Polivitex.

Diese Ergänzungen enthalten Vitamin B ₁₂ , L-Glutamin, Adenin, Guaninhydrochlorid, p-Aminobenzoesäure, Nicotinamidadenindinukleotid (NAD), Thiaminpyrophosphat, Eisennitrat, Thiaminhydrochlorid, Cysteinhydrochlorid, L-Cystin und Glucose.

Es ist wichtig zu beachten, dass Schokoladenagar stärker angereichert ist als Blutagar, jedoch keine Beobachtung von Hämolysemustern zulässt.

Anwendungen

Quelle: pixnio.com. Autor:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, Audra Marsh, USCDCP

Schokoladenagar hergestellt mit Columbia-Agar

Dieses Medium enthält Pankreasverdauung von Kasein und Herz, Magenverdauung von Fleisch, Natriumchlorid, Agar, Hefeextrakt und Maisstärke. Es ist auch reich an Vitaminen, Mineralien und essentiellen Aminosäuren.

Diese erhitzte Blutbasis ist ideal für die Isolierung von Bakterien der Gattung Neisseria. Wenn andererseits dem Medium zusätzlich eine Ergänzung für Brucella zugesetzt wird, kann der erwähnte Mikroorganismus isoliert werden. Die Ergebnisse werden mit Pferdeblut verbessert.

Schokoladenagar hergestellt mit GC-Basisagar (für Gonokokken)

Dieses Medium enthält Peptonen, Maisstärke, einbasige und zweibasische Puffer, Natriumchlorid und Agar.

Die meisten kommerziell hergestellten Schokoladenagar-Präsentationen basieren auf dieser Basis und enthalten kein erhitztes Blut, sondern eine synthetische Mischung aus Hämin und einer chemischen Ergänzung aus Wachstumsfaktoren, Vitaminen, Mineralien, Aminosäuren, Faktor V und Glucose.

Schokoladenagar hergestellt mit Müeller Hinton Agar

Es wird verwendet, um die antimikrobielle Empfindlichkeit anspruchsvoller Mikroorganismen wie Streptococcus pneumoniae unter Verwendung von 5% erhitztem Schafblut zu testen.

Es wird auch zur primären Isolierung von Neisserias und Haemophilus verwendet, aber im besonderen Fall der Isolierung von Haemophilus wird die Verwendung von Pferdeblut bevorzugt, da es eine reichhaltige Quelle für Faktor X und V ist.

Wenn andererseits die zu säende Probe aus einem nicht sterilen Bereich stammt, wird die Zugabe von Antibiotika empfohlen, um die normale Flora des Bereichs zu hemmen.

Beispiel für Atemwegsproben, bei denen das Vorhandensein von Bakterien der Gattung Haemophilus vermutet wird, wird Bacitracin verwendet, um das Wachstum von Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus und saprophytischen Neisserias zu hemmen.

Bei Genital-Chancre-Proben, bei denen der Verdacht auf Haemophilus ducreyi besteht, wurde ein wie folgt hergestellter Schokoladenagar erfolgreich eingesetzt: Müeller-Hinton-Agar mit 5% schokoladigem Pferdeblut, 1% Isovitalex-Anreicherung und 3 µg / ml Vancomycin.

Schokoladenagar hergestellt mit Thayer Martin Agar

Dieses Medium ist speziell für die Isolierung von Neisseria gonorrhoeae geeignet. Es muss Antibiotika enthalten, um die begleitende Flora zu hemmen. Lammblut wird verwendet.

Vorbereitung

Sie sollten die Indikationen für die Herstellung des zu verwendenden Basisagars sehen. Sie befinden sich auf der Rückseite des Behälters des dehydrierten Mediums. Sie beschreiben im Allgemeinen, wie viel Sie wiegen müssen, um einen Liter Kulturmedium zuzubereiten.

Die genaue benötigte Menge kann im Labor hergestellt werden, sie kann mehr oder weniger als einen Liter betragen.

Berechnungen

Eine Dreierregel wird verwendet, um zu berechnen, wie viel gewogen werden muss, um das gewünschte Volumen herzustellen. Beispiel:

Wenn für 1 Liter 40 g gewogen werden müssen und das Labor 800 ml benötigt, heißt es:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X.

Die Formel lautet wie folgt:

X = 32 g (zu wiegende Menge für 800 ml).

Wiegen und auflösen

Die notwendige Menge wird gewogen und mit dem Wasser in einen Kolben gegeben.

Bei mäßiger Hitze erhitzen und vorsichtig mit Drehbewegungen mischen, bis sich das dehydrierte Medium vollständig aufgelöst hat und 1 Minute kochen lässt.

Sterilisieren

Der Kolben wird in den Autoklaven gestellt, um das Medium 20 Minuten lang bei 121 ° C zu sterilisieren.

Blutaggregat

Beim Verlassen des Autoklaven wird stehen gelassen, bis die Temperatur des Mediums ungefähr zwischen 56 und 70 ° C liegt, um das Blut zu platzieren und zu mischen, bis das Medium braun wird.

Wenn Sie Ergänzungen hinzufügen, ist dies die Zeit, dies zu tun. Anschließend mischen und 20 ml in jede sterile Petrischale geben.

Der gesamte Vorgang sollte in einer Laminar-Flow-Haube oder um den Bunsenbrenner herum durchgeführt werden.

Lassen Sie es stehen, bis es fest wird, und lagern Sie es umgekehrt im Kühlschrank.

Eine andere Möglichkeit, Schokoladenagar ohne Blut zuzubereiten

Das Basismedium wird wie oben beschrieben hergestellt, das im Handel erhältliche dehydratisierte Hämoglobin wird im Autoklaven gelöst und sterilisiert.

Beide Lösungen werden auf 50 ° C abkühlen gelassen, zusammengefügt und die Ergänzung hinzugefügt. Unter aseptischen Bedingungen mischen und dann in sterilen Petrischalen servieren.

QA

Es ist wichtig, dass das Blut auf die angegebene Temperatur gebracht wird, da es ideal ist, um die roten Blutkörperchen zu lysieren und gleichzeitig den wärmeempfindlichen Faktor V aufrechtzuerhalten.

Auf der Oberfläche des Agars dürfen keine Blasen verbleiben. Von jeder Charge von 100 Platten sollten eine oder zwei Platten 24 Stunden bei 37 ° C im Ofen inkubiert werden, um ihre Sterilität zu überprüfen.

Für beste Ergebnisse sollte Schokoladenagar kurz nach der Zubereitung verwendet werden.

Kontrollbakterienstämme sollten im Labor aufbewahrt werden, um die Wirksamkeit des frischen Mediums für das Wachstum der wichtigsten anspruchsvollen Mikroorganismen von klinischer Bedeutung zu bewerten.

Verweise

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5. Wikipedia-Mitwirkende. Schokoladenagar. Wikipedia, die freie Enzyklopädie. 17. Dezember 2018, 19:54 UTC. Verfügbar unter: en.wikipedia.org.