Der Cetrimidagar oder Cetrimid ist ein selektives festes Kulturmedium, das zur Isolierung von Pseudomonas aeruginosa bestimmt ist. Es basiert auf der Darstellung der Produktion charakteristischer Pigmente dieser Art und wurde aus der Modifikation von Tech-Agar hergestellt, die von King, Ward und Raney hergestellt wurde.
Die ursprüngliche Formel enthielt Salze von Magnesiumchlorid, Kaliumsulfat, Pankreasverdauung von Gelatine und Agar-Agar. Die Modifikation der Formel bestand aus der Zugabe von Cetrimid (Cetyltrimethylammoniumbromid) und Glycerin.
Mit Pseudomonas aeruginosa besiedelter Cetrimid-Agar Quelle: BiotechMichael, aus Wikimedia Commons
Cetrimid-Agar ist nützlich für die mikrobiologische Untersuchung von Proben, bei denen das Vorhandensein von Pseudomonas aeruginosa vermutet wird. Es sollte beachtet werden, dass dieses Bakterium äußerst wichtig ist, da es, obwohl es Teil der normalen Umweltmikrobiota ist, sich häufig als opportunistischer Erreger verhält.
Aus diesem Grund sind nosokomiale Infektionen, dh solche, die im Krankenhaus auftreten und Patienten mit einem geschwächten Immunsystem angreifen, eines der häufigsten Probleme, die durch diesen Keim verursacht werden.
Andererseits sind aufgrund der Affinität dieses Mikroorganismus zur Feuchtigkeit die am stärksten gefährdeten Kontaminationsziele: Atemunterstützungsgeräte, Medikamente, Vernebler, Wasserquellen, Klimaanlagen, Desinfektionsmittel, Seifenlösungen, injizierbare Lösungen, offene Wunden , Katheter, Harnschläuche, unter anderem.
In diesem Sinne ist Cetrimidagar nützlich, um mikrobiologische Kontrollen und Kulturen an den zuvor erwähnten Elementen durchzuführen.
Basis
Cetrimid-Agar basiert auf der Fähigkeit des Mediums, das Wachstum von P. aeruginosa zu fördern, die Produktion seiner Pigmente zu stimulieren und wiederum das Wachstum anderer Mikroorganismen zu hemmen.
Diese Eigenschaften sind auf die Funktion jeder ihrer Komponenten zurückzuführen. Das vorhandene Gelatinepepton dient als Quelle für Stickstoff, Vitamine und Mineralien. Glycerin oder Glycerin wirkt als Kohlenstoffquelle.
Cetrimid (Cetyltrimethylammoniumbromid) ist seinerseits die Substanz, die das Wachstum anderer Bakterien als P. aeruginosa hemmt, einschließlich anderer Arten derselben Gattung.
Die Hemmung tritt auf, weil Cetramid als kationisches Detergens wirkt und die Plasmamembran der meisten Bakterien destabilisiert, mit Ausnahme von P. aeruginosa und einigen anderen, die überleben können.
Andererseits enthält es Magnesiumchlorid und Kaliumsulfat. Diese Verbindungen stimulieren die phänotypische Expression in Bezug auf die Fähigkeit von Pseudomonas aeruginosa, verschiedene Pigmente zu produzieren, einschließlich: Pyocyanin, Pyoverdin, Pyorrubin, Pyomelanin und Fluorescein. Schließlich enthält es Agar-Agar, was ihm eine feste Konsistenz verleiht.
Deutung
Die Interpretation des in diesem Agar erhaltenen Wachstums wird wie folgt durchgeführt:
Die Beobachtung runder, glatter Kolonien mit regelmäßigen Rändern unter Bildung von blaugrünlichen, grünen, braunen oder rötlichen Pigmenten sowie die Emission von fruchtigem Geruch (Aminoacetophenon) ist ein vermutliches Ergebnis des Vorhandenseins dieses Bakteriums in der Probe.
Andererseits weist die Beobachtung eines hellgelb-grünlichen Pigments auf den Kolonien auf P. aeruginosa hin, wenn die Platte ultraviolettem Licht ausgesetzt wird.
Fluoreszenz von P. aeruginosa-Kolonien auf Cetrimid-Agar unter ultraviolettem Licht.
Es ist zu beachten, dass jede beobachtete Farbe auf die Produktion eines bestimmten Pigments zurückzuführen ist. Das blaugrüne Pigment entspricht der Produktion von Pyocyanin, das Grün zu Pyoverdin, das Rötlich zu Pyorubin, das Braun zu Pyomelanin und die hellgelbgrüne Fluoreszenz unter UV-Licht zu Fluorescein.
Vorbereitung
43 g des dehydrierten Mediums werden abgewogen und in destilliertem Wasser gelöst. 10 ml Glycerin hinzufügen. Bringen Sie die Mischung zu einer Wärmequelle. Lassen Sie es einige Minuten kochen, bis es vollständig aufgelöst ist.
15 Minuten bei 121 ° C autoklavieren. Stehen lassen und in sterilen Petrischalen bei einer Temperatur von ca. 50 ° C servieren.
Erstarren lassen, umdrehen, in Plaqueros bestellen und bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahren. Cetrimid-Agarplatten sollten vor der Aussaat aus dem Kühlschrank genommen und auf Raumtemperatur gebracht werden.
Der endgültige pH-Wert des Mediums sollte 7,2 ± 0,2 betragen.
Die Farbe des dehydrierten Mediums ist beige und die Zubereitung ist opakweiß.
Anwendungen
Alle Arten von Proben, bei denen der Verdacht auf Pseudomonas aeruginosa besteht, können auf Cetrimidagar ausgesät werden. Daher ist es in allen Bereichen der Mikrobiologie (Umwelt, Industrie, Klinik, Wasser und Lebensmittel) nützlich.
Es ist von großer Bedeutung, die Krankenhausumgebung zu analysieren und somit Korrekturmaßnahmen anwenden zu können, da dieser Mikroorganismus die Patienten über kontaminierte Geräte, Medikamente, Lösungen und Verbrauchsmaterialien erreicht, die vom Patienten verwendet werden.
Auf diese Weise kann der Mikroorganismus die unteren Atemwege, Harnwege und Wunden von immunsupprimierten Patienten infizieren.
Die Kolonienzahlen von P. aeruginosa können auch in mikrobiellen Grenzwerttests durchgeführt werden.
Gesät
Cetrimidagar kann als Primärkultur verwendet werden. Die Platte wird an einer ihrer Kanten beimpft und von dort durch Erschöpfung auf den Rest der Platte verteilt. Flüssige Proben können mit einem Drigalski-Spatel an der Oberfläche ausgesät werden.
Die Platten werden 24 Stunden bei 37 ° C aerob inkubiert.
Einschränkungen
- Ein kleiner Prozentsatz der Pseudomonas aeruginosas-Stämme produziert kein Pyocyanin, sodass ein falsches Negativ interpretiert werden kann.
- Einige Pseudomonas-Arten von klinischer Bedeutung sind in diesem Medium gehemmt.
- Trotz der für Pseudomonas aeruginosa beschriebenen Merkmale müssen diese durch zusätzliche Identifizierungstests bestätigt werden. Ein Test, der nicht verpasst werden sollte, ist der Oxidase-Test, er muss positiv sein.
-Einige Enterobacteriaceae können in diesem Medium wachsen und ein gelbes Pigment entwickeln, aber es unterscheidet sich von Pseudomonas aeruginosa darin, dass bei Bestrahlung der Platte mit ultraviolettem Licht keine Fluoreszenz auftritt.
- Serratia marcescens entwickelt und produziert ein rosa Pigment.
-Wenn die mit Cetrimid-Agar ausgesäten Platten eine Zeit lang bei Raumtemperatur belichtet werden, können die P. aeruginosa-Stämme die unter ultraviolettem Licht beobachtete Fluoreszenz verlieren, die Eigenschaft wird jedoch wiederhergestellt, wenn sie erneut bei 37 ° C inkubiert werden.
QA
Um die gute Leistung von Cetrimidagar zu analysieren, können Kontrollstämme verwendet werden, wie: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 und Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Die erwarteten Ergebnisse sind:
- Gutes Wachstum für P. aeruginosa mit blaugrünem Pigment und positivem Fluorescein.
- S. maltophilia und S. aureus werden teilweise bis vollständig gehemmt.
- Es wird erwartet, dass Escherichia coli vollständig gehemmt ist.
Verweise
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- Britannia Laboratories. Cetrimid-Agar. 2015. Verfügbar unter: britanialab.com
- BD Laboratories. BD-Pseudosel-Agar (Cetrimid-Agar). 2013. Verfügbar unter: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratory, CA Cetrimid-Agar. 2009. Verfügbar unter: http://f-soria.es