BAIRD PARKER AGAR: GRUNDIERUNG, VORBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Der Agar Baird Parker ist eine feste mittelselektive und differenzielle Kultur. Es wurde 1962 zum Nachweis und zur Zählung von Koagulase-positiven Staphylokokken (Staphylococcus aureus) entwickelt.

Es besteht aus Pankreashydrolysat von Kasein, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Lithiumchlorid, Glycin, Natriumpyruvat, Kaliumtellurit, Agar und Eigelbemulsion.

Typische Staphylococcus aureus-Kolonien auf Baird Parker-Agar. Quelle: Daizy John

Baird Parker Agar basiert auf der Fähigkeit von S. aureus, Tellurit zu reduzieren und Lecithinase zu produzieren. Beide Eigenschaften erzeugen eine Kolonie mit spezifischen Eigenschaften für diese Art. Daher ist es beim Nachweis dieses Mikroorganismus hochwirksam.

Die typischen Kolonien von S. aureus sind schwarz oder dunkelgrau mit einem farblosen Rand und einem hellen Lichthof, der sie umgibt und sie von anderen Mikroorganismen unterscheidet. Dieser Erreger kann in klinischen Proben, Gewässern, Kosmetika sowie rohen oder gekochten Lebensmitteln gefunden werden.

Die Diagnose oder Erkennung ist von größter Bedeutung, da sie verschiedene Pathologien hervorruft, darunter Lebensmittelvergiftungen, Verbrühungshaut-Syndrom, Toxic-Shock-Syndrom, Abszesse, Meningitis, Septikämie und Endokarditis.

Basis

Nährende Kraft

Pankreas-Caseinhydrolysat, Fleischextrakt und Hefeextrakt sind die Quellen für Nährstoffe, Vitamine und Mineralien, die für die allgemeine mikrobielle Entwicklung erforderlich sind, während Pyruvat und Glycin Verbindungen sind, die das spezifische Wachstum von Staphylococcus aureus unterstützen.

Selektiv

Baird Parker Agar ist selektiv, da er Substanzen enthält, die das Wachstum der begleitenden Flora hemmen und gleichzeitig die Entwicklung von S. aureus fördern. Die inhibitorischen Verbindungen sind Lithiumchlorid und Kaliumtellurit.

Differential

Dieses Medium ermöglicht es, S. aureus vom Rest der Koagulase-negativen Staphylokokken zu unterscheiden. S. aureus hat die Fähigkeit, Tellurit zu freiem metallischem schwarzem Tellur zu reduzieren und schwarze oder dunkelgraue Kolonien zu bilden.

Ebenso liefert das Eigelb die Substrate, um das Vorhandensein des Enzyms Lecithinase und Lipase nachzuweisen. S. aureus ist Lecithinase-positiv und daher wird ein klarer Lichthof um die Kolonie herum beobachtet, was darauf hinweist, dass das Lecithin hydrolysiert wurde.

In diesem Sinne weist das Auftreten von glänzenden schwarzen oder dunkelgrauen Kolonien mit einem hellen Lichthof auf diesem Agar auf das Vorhandensein von S. aureus hin.

Wenn sich eine Fällungszone bildet, zeigt dies die Lipaseaktivität an. Einige Stämme von S. aureus sind Lipase-positiv und andere negativ.

In dem Fall, dass S. aureus Lipase-positiv ist, wird ein undurchsichtiger Bereich um die schwarze oder dunkelgraue Kolonie und dann ein heller Lichthof aufgrund der Wirkung von Lecithinase beobachtet.

Andere Bakterienkolonien als S. aureus, die auf diesem Medium wachsen können, entwickeln farblose oder braune Kolonien ohne umgebenden Lichthof.

Atypische schwarze Kolonien können auch mit oder ohne farblosen Rand gesehen werden, jedoch ohne hellen Lichthof. Diese Kolonien sollten nicht berücksichtigt werden, sie entsprechen nicht S. aureus.

Vorbereitung

Eigelbemulsion

Nehmen Sie ein frisches Hühnerei, waschen Sie es gut und legen Sie es 2 bis 3 Stunden lang in 70% igen Alkohol. Das Ei wird dann aseptisch geöffnet und das Weiß vorsichtig vom Eigelb getrennt. Danach werden 50 ml des Eigelbs entnommen und mit 50 ml steriler physiologischer Lösung gemischt.

Kaliumtellurit 1% w / v

Einige Handelshäuser verkaufen 1% Kaliumtellurit gebrauchsfertig. Es wird dem Medium zugesetzt, bevor sich das Medium verfestigt.

Zur Herstellung dieser Lösung im Labor werden 1,0 g Kaliumtellurit gewogen und in einem Teil Wasser gelöst. Anschließend wird die Wassermenge bis zum Erreichen von 100 ml vervollständigt. Die Lösung muss durch die Filtrationsmethode sterilisiert werden.

Vorbereitung des Kulturmediums

60 g des dehydrierten Mediums werden abgewogen und in 940 ml destilliertem Wasser gelöst. Lassen Sie die Mischung ca. 5-10 Minuten ruhen.

Wenden Sie Wärme an, indem Sie das Medium häufig umrühren, um den Auflösungsprozess zu verbessern. Zum Kochen bringen. Im Autoklaven 15 Minuten bei 121 ° C sterilisieren.

Stehen lassen, bis eine Temperatur von 45 ° C erreicht ist, und 50 ml der Eigelbemulsion und 10 ml 1% Tellurit hinzufügen. Gut mischen und 15-20 ml auf sterile Petrischalen gießen.

Erstarren lassen, in Plaquern umgedreht bestellen und bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahren.

Der endgültige pH-Wert des hergestellten Mediums muss 6,8 ± 0,2 betragen.

Warten Sie vor dem Aussäen einer Probe, bis die Platte Raumtemperatur erreicht hat. Die Platten durch Streifen oder durch Aussäen mit einem Drigalski-Spatel aussäen.

Die Farbe des dehydrierten Mediums ist hellbraun und die Farbe des hergestellten Mediums ist hell bernsteinfarben.

Verwenden

Klinische Proben

Die klinischen Proben werden direkt ausgesät, wobei ein Teil des Materials an einem Ende der Platte austritt und von dort durch Erschöpfung gestreift wird. 24 bis 48 Stunden bei 35-37 ° C inkubieren.

Lebensmittelproben

10 g der Lebensmittelprobe werden gewogen und in 90 ml 0,1% igem Peptonwasser homogenisiert. Daraus werden gegebenenfalls Verdünnungen hergestellt. Inokulieren Sie die Platten dreifach mit 0,3 ml der vorbereiteten Lösungen und säen Sie sie mit einem Drigalski-Spatel auf die Oberfläche. 24 bis 48 Stunden bei 35-37 ° C inkubieren.

Diese Methode ermöglicht die Zählung der typischen erhaltenen Kolonien und ist ideal, wenn das Vorhandensein von S. aureus über 10 KBE pro g / ml Probe vermutet wird.

Wenn der Verdacht besteht, dass die Menge an S. aureus gering ist oder viel Flora vorhanden ist, wird empfohlen, die Probe in Trypticase-Soja-Brühe mit 10% NaCl und 1% Natriumpyruvat anzureichern. Dies fördert das Wachstum von S. aureus und hemmt die Entwicklung der begleitenden Flora. Trübe Röhrchen werden auf Baird Parker-Agar ausgesät.

Wasserproben

In einem sterilisierten Vakuumfiltrationssystem werden 100 ml Studienwasser filtriert und anschließend die mikroporöse 0,4-Mikron-Membran mit einer sterilen Pinzette entfernt und auf eine Baird Parker-Platte gelegt. 24 bis 48 Stunden bei 35-37 ° C inkubieren. Diese Technik ermöglicht das Zählen typischer S. aureus-Kolonien.

QA

Bekannte Stämme wie Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 oder Proteus mirabilis ATCC 43071 können verwendet werden, um die Qualität von Baird Parker-Agar zu bewerten.

Im Fall von S. aureus ATCC-Stämmen ist bekannt, dass sie Tellurit reduzieren, und sie sind Lipase- und Lecithinase-positiv. Daher muss es eine zufriedenstellende Entwicklung geben und konvexe Kolonien mit einem schwarzen Zentrum und einem farblosen Rand mit einem undurchsichtigen Lichthof und einem leicht äußersten Lichthof wachsen.

Es wird erwartet, dass sich S. epidermidis auf diesem Medium mit bräunlich-grauen bis schwarzen Kolonien ohne hellen Lichthof schlecht entwickelt.

Für E. coli und P. mirabilis wird eine vollständige oder teilweise Hemmung erwartet. Im Falle eines Wachstums entwickeln sich braune Kolonien ohne einen undurchsichtigen Bereich oder einen hellen Lichthof.

Empfehlungen

-Das Medium sollte nach Zugabe von Tellurit und Eigelb nicht erhitzt werden.

-Die Herstellung der Eigelbemulsion und ihre Zugabe in der Mitte ist ein sehr anfälliger Schritt für eine Kontamination. Es ist äußerste Vorsicht geboten.

-Wenn typische Kolonien von S. aureus vorhanden sind, sollte dies durch Durchführung eines Koagulase-Tests an diesem Stamm bestätigt werden.

-Wenn es zweifelhafte Ergebnisse mit Koagulase gibt, sollten andere Bestätigungstests durchgeführt werden.

- Achten Sie darauf, das Vorhandensein typischer S. aureus-Kolonien nicht mit atypischen schwarzen Kolonien zu verwechseln.

Verweise

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