TETRATHIONATBRÜHE: BEGRÜNDUNG, ZUBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Die Tetrathionatbrühe oder Brühe TT ist ein selektives flüssiges Kulturmedium zur Anreicherung und Gewinnung der Salmonellenstämme der Gattung. Es wurde von Müeller kreiert und später von Kauffmann modifiziert, weshalb es diejenigen gibt, die es Müeller-Kauffmann-Brühe nennen.

Das ursprüngliche Medium enthielt Proteosepeptone, Calciumcarbonat und Natriumthiosulfat. Kauffmann fügte Gallensalze hinzu und schuf eine weitere Modalität mit hellem Grün. Diese Substanzen hemmen das Wachstum von Coliformen und lassen das Medium frei für die Entwicklung pathogener Bakterien, in diesem Fall Salmonellen.

Zugabe der Jod-Jod-Lösung zur Tetrathionat-Brühe. Quelle: Manuel Almagro Rivas

Die Modifikation war sehr erfolgreich, da sie die Empfindlichkeit des Mediums signifikant erhöhte. Aus diesem Grund ist es derzeit nützlich für die Suche nach Salmonellen in jeder Art von Probe, insbesondere aber für feste oder flüssige Stühle und Lebensmittel.

Seine Vorbereitung besteht aus zwei Phasen; Das kommerzielle Medium ist eine Basis zur Herstellung der Tetrathionatbrühe, und anschließend wird, um das Tetrathionat zu bilden, eine iodierte Iodlösung zugegeben, um das Medium zu vervollständigen.

Die American Public Health Association (APHA) empfiehlt die Verwendung von Tetrathionatbrühe mit hellgrünem Zusatz zur Anreicherung von Salmonellenproben, da diese selektiver ist als Tetrathionatbrühe und Selenitbrühe.

Im Allgemeinen ist Tetrathionatbrühe ideal, wenn das Vorhandensein von Bakterien der Gattung Salmonella in geringen Mengen vermutet wird oder wenn sie durch Exposition gegenüber hemmenden Substanzen oder durch industrielle Prozesse, die ihre Lebensfähigkeit minimieren, missbraucht werden.

Basis

Die vorhandenen Peptonen entsprechen dem Pankreasverdau von Kasein und dem peptischen Verdau von tierischem Gewebe. Diese liefern die Quelle für Kohlenstoff, Stickstoff und allgemeine Nährstoffe für das Bakterienwachstum.

Natriumthiosulfat reagiert seinerseits mit der iodierten Lösung unter Bildung von Tetrathionat. Dies hemmt das Wachstum von Coliformen und begünstigt die Entwicklung von Bakterien, die das Enzym Tetrathionatreduktase enthalten, darunter die Gattung Salmonella, aber auch Proteus.

Gallensalze wirken auch als Hemmstoff für die meisten grampositiven und einige gramnegativen Bakterien (Coliforme).

Calciumcarbonat absorbiert die toxischen Substanzen, die durch die Zersetzung von Tetrathionat entstehen, das Schwefelsäure bildet. In diesem Sinne neutralisiert Calciumcarbonat den Säuregehalt und hält den pH-Wert des Mediums stabil.

Im Fall der hellgrünen Modalität erhöht diese Substanz die Selektionskraft der Tetrathionatbrühe, indem sie andere Mikroorganismen als die Gattung Salmonella hemmt.

Vorbereitung

-Tetrathionatbrühe

Jod Jodlösung

Wiegen:

• 6 Gramm Jod.
• 5 g Kaliumiodid.

Das Kaliumiodid wird in ungefähr 5 ml sterilem destilliertem Wasser gelöst, dann wird das Jod nach und nach zugegeben, während die Mischung erhitzt wird. Nach dem vollständigen Auflösen mit sterilem destilliertem Wasser bis zur Marke auffüllen, bis ein Endvolumen von 20 ml erreicht ist.

Basismedium für Tetrathionatbrühe

46 g des dehydrierten Mediums werden gewogen und in 1 Liter sterilem destilliertem Wasser suspendiert. Mischen und erhitzen, bis es vollständig aufgelöst ist. Es kann nur einige Minuten lang zum Kochen gebracht werden. Nicht autoklavieren. Die Basis des Mediums wird auf ungefähr 45 ° C abkühlen gelassen und zu diesem Zeitpunkt werden 20 ml der iodierten Lösung zugegeben.

Nach Zugabe der jodierten Lösung zum Medium sollte diese sofort verwendet werden. Wenn Sie nicht die gesamte Mischung verwenden möchten, gehen Sie wie folgt vor:

10 ml des Basismediums werden in Röhrchen verteilt und nur zu denen, die mit Proben beimpft werden sollen, werden 0,2 ml der iodierten Lösung zugegeben.

Diejenigen, die nicht verwendet werden sollen, können weiterhin im Kühlschrank aufbewahrt werden. Da das Medium jedoch nicht sterilisiert ist, ist es ideal, die genaue Menge vorzubereiten, die benötigt wird.

Die Farbe des Mediums vor der Zugabe der iodierten Jodlösung ist milchig weiß mit einem weißen Niederschlag und nach der Zugabe ist es braun mit einem dichten Niederschlag. Der beobachtete Niederschlag ist normal und entspricht Calciumcarbonat, das sich nicht löst. Der endgültige pH-Wert des Mediums beträgt 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionate Brühe Variante mit hellem Grün

Zur Herstellung der hellgrünen Tetrathionatbrühe werden alle oben beschriebenen Schritte durchgeführt, aber zusätzlich werden 10 ml der hellgrünen Lösung, die mit 0,1% hergestellt wurde, zu der Mischung gegeben.

Grün leuchtend

Diese Lösung wird wie folgt hergestellt:

0,1 g hellgrün abwiegen und in 100 ml destilliertem Wasser suspendieren. Zum Kochen bringen, um eine vollständige Auflösung zu erreichen. In bernsteinfarbener Flasche aufbewahren.

Verwenden

Für Stuhlproben (Stuhlkultur) lautet das Protokoll wie folgt:

1 g festen Stuhl oder 1 ml flüssigen Stuhl in ein Röhrchen mit 10 ml gebrauchsfertiger Tetrathionatbrühe beimpfen. Kräftig schütteln und 6-24 Stunden bei 43 ° C aerob inkubieren.

Nehmen Sie anschließend ein 10 bis 20 µl Aliquot der Brühe und Subkultur in einem selektiven Medium für Salmonellen, wie z. B. SS-Agar, XLD-Agar, hellgrüner Agar, Hektoen-enterischer Agar usw.

Parallel dazu sollten selektive Medien für Salmonellen mit der direkten Probe (Kot) ohne Anreicherung beimpft werden. Bei Rektaltupferproben das gesammelte Material in das Röhrchen entladen und wie oben beschrieben vorgehen.

Wiegen Sie für Lebensmittelproben 10 g feste Lebensmittel oder 10 ml flüssige Lebensmittel und beimpfen Sie eine Flasche mit 100 ml gebrauchsfertiger Tetrathionatbrühe. Gehen Sie wie oben beschrieben vor, inkubieren Sie jedoch bei 37 ° C.

Wie zu sehen ist, beträgt die Beziehung zwischen der Probe und der Brühe immer 1:10.

QA

Bekannte Kontrollstämme können verwendet werden, um das Kulturmedium zu testen. Am weitesten verbreitet sind ATCC-zertifizierte Stämme.

Die zu verwendenden Stämme sind Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 und Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Für Salmonella-Stämme wird ein ausgezeichnetes Wachstum erwartet, während Escherichia coli ein schwaches oder regelmäßiges Wachstum aufweisen kann und grampositive Stämme (Enterococcus und Staphylococcus) teilweise oder vollständig gehemmt sind.

Empfehlungen

- Da dieses Medium das Wachstum von Proteus nicht hemmt, verwenden einige Laboratorien 40 mg / l Novobiocin, um die Entwicklung dieses mikrobiellen Stammes zu verhindern. Das Antibiotikum muss vor der Jodlösung zugegeben werden.

- Nach der Herstellung des Mediums einschließlich der Jod-Jod-Lösung sollte das Inokulieren nicht länger als 2 Stunden dauern.

- Wenn das Medium in den Röhrchen verteilt wird, muss die Mischung kontinuierlich homogenisiert werden, um den gebildeten Niederschlag zu resuspendieren.

-In weniger kontaminierten Proben wird die Tetrathionatbrühe bei 35-37 ° C inkubiert, und in stark kontaminierten Proben wird eine Inkubation bei 43 ° C empfohlen.

Verweise

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