TRYPTICASEIN-SOJA-BRÜHE: GRUNDLAGE, ZUBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Das Trypton aus Soja-Brühe ist ein flüssiges Kulturmedium, sehr nahrhaft und nicht selektiv. Aufgrund seiner großen Vielseitigkeit ist es eines der am häufigsten verwendeten Flüssigkulturmedien im mikrobiologischen Labor.

Es ist auch unter dem Namen Tryptic Soja Broth oder Casein-Soja Digested bekannt, dessen Abkürzung TSB für sein Akronym in Englisch Tryptic Soy Broth oder CST für sein Akronym in Spanisch ist. Seine Verwendung ist aufgrund seiner Zusammensetzung sehr unterschiedlich. Es besteht aus Triptein, Sojapepton, Natriumchlorid, Dikaliumphosphat und Glucose.

Trypticasein-Soja-Brühe, die mit einem Stamm von Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ausgesät wurde, wobei eine Pigmentproduktion beobachtet wird. Quelle: Foto des Autors MSc. Marielsa Gil.

Es ist in der Lage, klinisch wichtige pathogene Bakterien zu reproduzieren, einschließlich solcher, die ernährungsphysiologisch anspruchsvolle und anaerobe Bakterien sind. In dieser Umgebung können sich auch einige opportunistische und kontaminierende Pilze entwickeln.

Aufgrund seiner hohen Nährleistung weist es eine hohe Empfindlichkeit zum Nachweis von mikrobieller Kontamination auf. Aus diesem Grund wurde es vom USDA Animal and Plant Health Inspection Service für die mikrobiologische Analyse von Impfstoffen ausgewählt.

Ebenso erfüllt Trypticasein-Soja-Brühe die Anforderungen der verschiedenen Arzneibücher (European EP, Japanese JP und North American USP) für die mikrobiologische Untersuchung von Produkten auf industrieller Ebene wie Kosmetika und Lebensmitteln.

Andererseits ist es erwähnenswert, dass dieses Medium trotz seiner großen Nützlichkeit relativ kostengünstig ist, was es für die meisten Mikrobiologielabors erschwinglich macht. Es ist auch sehr einfach zuzubereiten.

Basis

Triptein, Pepton und Glucose bieten wesentliche ernährungsphysiologische Eigenschaften, um es zu einem idealen Medium für ein schnelles mikrobielles Wachstum zu machen.

In ungefähr 6 bis 8 Stunden Inkubation ist bei den meisten Mikroorganismen bereits Wachstum zu beobachten. Es gibt jedoch langsam wachsende Stämme, deren Wachstum Tage dauern kann.

Natriumchlorid und Dikaliumphosphat wirken als osmotisches Gleichgewicht bzw. pH-Regler. Das Vorhandensein von Wachstum wird durch das Auftreten von Trübung im Medium belegt; Wenn es kein Wachstum gibt, bleibt das Medium durchscheinend.

Aufgrund seiner hellen Farbe ist es möglich, die Produktion von Pigmenten zu beobachten, wie die im Bild am Anfang des Artikels gezeigte, die dem von Pseudomonas aeruginosa produzierten Pigment entspricht.

Vorbereitung

-Triptysein-Soja-Brühe

Zur Herstellung von tryptischer Sojabrühe müssen 30 g des dehydrierten Handelsmediums auf einer Digitalwaage gewogen werden. Dann wird es in einem Liter destilliertem Wasser gelöst, das in einem Kolben enthalten ist.

Die Mischung wird 5 Minuten ruhen gelassen und dann zu einer Wärmequelle gebracht, um das Medium aufzulösen. Es sollte häufig gerührt werden, während 1 Minute gekocht wird.

Nach dem Auflösen wird es nach Bedarf in Röhrchen der entsprechenden Größe verteilt. Es können Röhren mit Baumwollstopfen oder mit Bakelitkappen verwendet werden. Anschließend werden die Röhrchen mit dem Medium im Autoklaven 15 Minuten bei 121 ° C sterilisiert.

Der pH-Wert des Mediums muss bei 7,3 ± 0,2 bleiben

Es ist zu beachten, dass die Farbe des dehydrierten Kulturmediums hellbeige ist und zwischen 10 und 35 ° C an einem trockenen Ort gelagert werden sollte. Während die vorbereitete Brühe hell bernsteinfarben ist und im Kühlschrank (2 bis 8 ° C) aufbewahrt werden sollte.

-Varianten von Trypticasein-Soja-Brühe

Modifizierte Trypticasein-Soja-Brühe kann durch Zugabe von Gallensalzen und Novobiocin hergestellt werden, um sie für die Isolierung von E. coli selektiv zu machen. Eine weitere Option für den gleichen Zweck ist die Herstellung von Trypticase-Soja-Brühe, die mit Vancomycin, Cefixim und Tellurit (2,5 µg / ml) ergänzt ist.

Andererseits kann der tryptischen Sojabrühe mehr Glucose (0,25%) zugesetzt werden, wenn das Ziel darin besteht, die Bildung von Biofilmen zu stimulieren.

Verwenden

Es ist nahrhaft genug, um das Wachstum von anspruchsvollen oder anspruchsvollen Bakterien wie Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp und Brucella sp zu ermöglichen, ohne dass Blut oder Serum hinzugefügt werden müssen.

Ebenso können sich in dieser Brühe einige Pilze entwickeln, wie Candida albicans Complex, Aspergillus sp und Histoplasma capsulatum.

Darüber hinaus ist dieses Medium unter anaeroben Bedingungen ideal zur Gewinnung von Bakterien der Gattung Clostridium sowie von nicht sporulierten anaeroben Bakterien von klinischer Bedeutung.

Wenn 6,5% Natriumchlorid zugesetzt wird, kann es für das Wachstum von Enterococcus und anderen Streptococcus der Gruppe D verwendet werden.

Auf Forschungsebene war es in verschiedenen Protokollen sehr nützlich, insbesondere bei der Untersuchung von Biofilm oder biofilmbildenden Bakterien. Es wird auch verwendet, um die 0,5% ige Mac Farland-Bakteriensuspension herzustellen, die zur Durchführung des Antibiogramms nach der Kirby- und Bauer-Methode erforderlich ist.

In diesem Fall werden 3 bis 5 Kolonien mit ähnlichem Aussehen entnommen und in 4 bis 5 ml Trypticasein-Soja-Brühe emulgiert. Es wird dann 2 bis 6 Stunden bei 35-37 ° C inkubiert und anschließend mit steriler Kochsalzlösung auf die gewünschte Konzentration eingestellt. Trypticasein-Soja-Brühen sollten 18 bis 24 Stunden nach der Inkubation nicht verwendet werden.

Gesät

Die Probe kann direkt ausgesät werden oder reine Kolonien, die aus selektiven Medien entnommen wurden, können subkultiviert werden. Das Inokulum sollte klein sein, um das Medium vor der Inkubation nicht zu trüben.

Normalerweise wird es 24 Stunden bei 37 ° C in Aerobiose inkubiert, aber diese Bedingungen können je nach dem gesuchten Mikroorganismus variieren. Bei Bedarf kann es auch unter anaeroben Bedingungen mehrere Tage bei 37 ° C inkubiert werden. Beispielsweise können schnell wachsende oder anspruchsvolle Mikroorganismen bis zu 7 Tage inkubiert werden.

Bei der mikrobiologischen Analyse von pharmazeutischen Substanzen - wie Impfstoffen - sind die Protokolle strenger. In diesen Fällen wird die Brühe ohne Wachstum erst nach 14 Tagen kontinuierlicher Inkubation verworfen.

QA

Von jeder hergestellten Charge sollten 1 oder 2 nicht inokulierte Röhrchen inkubiert werden, um ihre Sterilität zu demonstrieren. Es muss unverändert bleiben.

Bekannte Stämme können auch gepflanzt werden, um ihr Verhalten zu beurteilen. Unter den Stämmen, die verwendet werden können, sind:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 oder 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305, Pneumoniae ATCC28as.

In allen Fällen muss das Wachstum unter den für jeden Mikroorganismus geeigneten Atmosphären- und Temperaturbedingungen zufriedenstellend sein.

Einschränkungen

-Die Fermentation von Glucose bewirkt eine Abnahme des pH-Werts des Mediums aufgrund der Produktion von Säuren. Dies kann für das Überleben einiger säureempfindlicher Mikroorganismen ungünstig sein.

-Es wird nicht für die Aufrechterhaltung von Stämmen empfohlen, da Bakterien zusätzlich zum Säuregehalt nach einigen Tagen Nährstoffe verbrauchen und sich dadurch toxische Substanzen ansammeln, die die Umwelt unwirtlich machen.

- Sie müssen sich um alle Sterilitätsprotokolle kümmern, da die Brühen leicht kontaminiert werden können.

- Nach der Zubereitung der Trypticasein-Soja-Brühe sollten Sie nicht versuchen, die Brühe in ein anderes steriles Röhrchen zu überführen, da diese Art von Manöver sehr anfällig für Kontaminationen ist.

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