SELENITBRÜHE: GRUNDIERUNG, ZUBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Der Selenit ist ein selektives flüssiges Kulturmedium. Es wurde von Leifson zur Anreicherung von Proben entwickelt, bei denen der Verdacht auf enteropathogene Bakterien der Gattung Salmonella besteht.

Dieses Medium entspricht den Anforderungen der American Public Health Association (APHA) und ist daher für die Untersuchung des Vorhandenseins von Salmonellen in Proben von Kot, Urin, flüssigen oder festen Lebensmitteln, Wasser ua zugelassen.

Selenitbrühe. Quelle: Foto des Autors MSc. Marielsa Gil

Seine chemische Zusammensetzung begünstigt die Rückgewinnung dieser Mikroorganismen und hemmt wiederum das Wachstum anderer. Es ist hauptsächlich toxisch für die meisten Bakterien der Enterobacteriaceae-Familie. Es ermöglicht jedoch auch die Gewinnung von Shigella-Stämmen und hemmt nicht das Wachstum von Pseudomonas und Proteus.

Es besteht aus wasserfreiem Natriumhydrogenselenit, wasserfreiem Natriumphosphat, Peptonen und Lactose. Es gibt auch eine Variante, zu der Cystin hinzugefügt wird, daher der Name Selenit-Cystin-Brühe.

Gegenwärtig wird die Verwendung von Selenit-Cystin-Brühe bevorzugt, da ein höherer Prozentsatz der Salmonellen-Rückgewinnung erhalten wird, der dem entspricht, der mit anderen selektiven Medien für den gleichen Zweck wie Natriumtetrathionat-Brühe beobachtet wurde.

Basis

Die in der Brühe enthaltenen Peptonen dienen als Nährstoffe für die ordnungsgemäße Entwicklung von Mikroorganismen. Salmonellenstämme verwenden Peptonen als Quelle für Stickstoff, Vitamine und Aminosäuren.

Laktose ist das fermentierbare Kohlenhydrat, während Natriumselenit die hemmende Substanz ist, die das Wachstum von grampositiven Bakterien und den meisten in der Darmflora vorhandenen Bakterien, insbesondere der Enterobacteriaceae-Familie, stoppt. Natriumphosphat ist der Puffer, der den pH-Wert des Mediums stabilisiert.

Im Fall der L-Cystin enthaltenden Selenitbrühe-Variante ist diese zusätzliche Verbindung ein Reduktionsmittel, das die Toxizität von Selenit minimiert und die Rückgewinnung von Salmonellen erhöht.

Vorbereitung

-Selenitbrühe

Wenn Sie die Bestandteile der Mischung haben, können Sie wiegen:

4 g wasserfreier Natriumhydrogenselenit.

10 g wasserfreies Natriumphosphat.

5 g Peptonen.

4 Gramm Laktose.

Löse die Verbindungen in 1 Liter sterilem destilliertem Wasser. Es kann leicht erhitzt werden, um sich vollständig aufzulösen.

Einige Laboratorien setzen das Medium 10 Minuten lang in fließendem Dampf aus, um es zu sterilisieren, da es nicht autoklaviert werden sollte. Wenn das Medium sterilisiert ist, kann es bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahrt werden.

Es kann auch nicht steril hergestellt und direkt 10-15 ml in sterile Reagenzgläser gegeben werden.

In diesem Fall sollte es sofort ruhen und verwendet werden. Da das Medium nicht steril ist, kann es zur späteren Verwendung nicht im Kühlschrank aufbewahrt werden.

- Vorbereitung des kommerziellen Umfelds

Wenn das kommerzielle Medium verfügbar ist, wiegen Sie 23 g des dehydrierten Mediums und lösen Sie es in einem Liter sterilem destilliertem Wasser. Kurz erhitzen, um das Auflösen zu beenden. Nicht autoklavieren. 10 oder 15 ml in sterilen Reagenzgläsern aseptisch servieren.

Der endgültige pH-Wert des Mediums sollte 7,0 ± 0,2 betragen.

Es ist zu beachten, dass die Farbe des dehydrierten Mediums beige ist und die Zubereitung hell und durchscheinend bernsteinfarben ist.

Variante der Selenit-Cystin-Brühe

Es enthält die gleichen Verbindungen wie Selenitbrühe, jedoch werden 10 mg Cystin zugesetzt. Der Rest des Verfahrens ist genau der gleiche wie oben beschrieben.

Anwendungen

Dieses Medium ist speziell für epidemiologische Studien geeignet, wenn die Krankheit nicht im akuten Stadium ist, asymptomatische Patienten oder gesunde Träger.

Die Isolierung der Gattung Salmonellen ist im Allgemeinen schwierig, da es sich normalerweise nur um schlecht kontaminierende Proben handelt. Da es sich um kleine Mengen handelt, kann es leicht durch das Wachstum anderer Bakteriengattungen überlappt werden, die in größeren Mengen vorkommen.

Andererseits ist der Rohstoff, aus dem verarbeitete Lebensmittel hergestellt werden, häufig Hitze, Dehydratisierungsprozessen, der Verwendung von Desinfektionsmitteln, Strahlung und Konservierungsmitteln ausgesetzt.

Daher werden die im Rohmaterial enthaltenen Salmonellen misshandelt, indem das Produkt den oben genannten industriellen Prozessen ausgesetzt wird. Ebenso können bei klinischen Proben wie Kot die Stämme schwach sein, wenn sie von Patienten stammen, die mit Antibiotika behandelt wurden.

Daher sollte jede Probe, bei der der Verdacht auf Salmonellen besteht, mit Lactose-Bouillon vorangereichert und anschließend mit Selenit-Bouillon angereichert werden, um ihre Gewinnung in selektiven Medien wie SS-Agar, Xylose-Agar, Lysin-Desoxycholat (XLD) zu optimieren ), enterischer Hektoen-Agar (HE) und hellgrüner Agar unter anderem.

Gesät

Für Stuhlproben 1 g Probe entnehmen und in einem Röhrchen mit 10 bis 15 ml Selenitbrühe suspendieren. Wenn der Stuhl flüssig ist, nehmen Sie 1 ml und suspendieren Sie in der Brühe. Bei Rektaltupfern das Tupfermaterial in die Brühe entladen.

In festen Lebensmittelproben 1 g nehmen und in der Selenitbrühe suspendieren.

In flüssigen Lebensmitteln zu gleichen Teilen mit der Selenitbrühe in doppelter Konzentration mischen.

Für Urinproben zentrifugieren, den Überstand verwerfen, das gesamte Sediment entnehmen und in der Selenitbrühe suspendieren.

Die Brühen werden 24 Stunden bei 37 ° C inkubiert. Das Bakterienwachstum wird durch Trübung nachgewiesen. Ein zusätzliches Röhrchen pro Probe kann ebenfalls zur Inkubation bei 42 ° C enthalten sein. Anschließend werden selektive feste Medien aus der Selenitbrühe ausgesät.

QA

Zur Kontrolle der Sterilität wird eine Selenitbrühe aus jeder nicht inokulierten Charge 24 Stunden bei 37 ° C inkubiert. Es wird erwartet, dass es keine Trübung oder Farbänderung des Mediums gibt.

Bekannte Stämme können verwendet werden, um die ordnungsgemäße Funktion des Mediums zu steuern, wie z.

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 und Proteus mirabilis ATCC 43071.

Die erwarteten Ergebnisse sind:

• Für die ersten drei Bakterienstämme muss das Wachstum zufriedenstellend sein.
• Für Escherichia coli partielle Hemmung.
• Für Proteus mäßiges Wachstum.

Einschränkungen

Das Medium der Selenitbrühe ist giftig für die menschliche Haut, daher sollte ein direkter Kontakt vermieden werden.

Verweise

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