NEUBAUER KAMMER: GESCHICHTE, EIGENSCHAFTEN, VERWENDUNGEN - BIOLOGIE - 2025

Die Neubauer-Kammer , das Hämatometer oder das Hämozytometer, ist ein Laborinstrument, das aus einer speziellen dicken Glasplatte besteht. Diese Kamera wird verwendet, um einige Zelltypen wie rote Blutkörperchen, weiße Blutkörperchen und Blutplättchen zu zählen, obwohl sie zum Zählen von Sporen, Spermien, Parasiten usw. verwendet werden kann.

Es weist einige sehr eigenartige Merkmale auf, da es aus 3 Zonen besteht, einer zentralen Zählzone und zwei Stützzonen. Jede Kammer hat zwei Zählzonen oder Fadenkreuze, eine oben und eine unten.

Neubauer Kammer. Quelle: SantiBadia. Bearbeitetes Bild.

Diese haben mehrere Unterteilungen in Rasterform. Die Zählbereiche sind die mittleren Quadrate an den 4 Ecken beider Raster sowie das zentrale Quadrat.

Die Montage der Kamera muss mit größter Sorgfalt erfolgen, da jedes Detail die Zellenzahl beeinflusst. Es gibt viele Fehler, die gemacht werden können, aber wenn einer von ihnen auftritt, muss die Kamera zerlegt, gereinigt und wieder zusammengebaut werden. Die Hauptfehler umfassen Folgendes:

Überlaufen der Kammer oder Unterfüllen, Trocknenlassen der Kammer, Versuch, überschüssige Flüssigkeit mit Gaze zu entfernen, Kippen der Kammer beim Transport, Füllen einer schmutzigen oder nassen Kammer, Nichtmischen der Verdünnung oder Probe unter anderem. Alle diese Fehler führen zu einem unwirklichen Wert.

Geschichte

Die Neubauer-Kammer ist ein Präzisionsinstrument, und der Herstellungsprozess unterliegt einer strengen Qualitätskontrolle. Es wurde für die genaue Zählung von Partikeln oder gebildeten Elementen pro mm ³ wie Zellen in verschiedenen Flüssigkeiten entwickelt. Die zarte Grafik ist mit einem Diamantstift geschnitzt.

Neubauer Kammermerkmale

Die gesamte Kammer hat die Größe eines normalen Objektträgers, so dass sie auf dem Mikroskoptisch platziert werden kann.

Die Kammer besteht aus drei zentralen rechteckigen Flächen (a, b, c). In der Zone „b“ befindet sich die R-Zone oder Zählzone, auch Retikulum genannt. Eine auf jeder Seite der Kamera, getrennt durch Zone "d".

Grafisches Diagramm der Neubauer Kammer. Quelle: Praktischer Leitfaden zur Hämatologie. Schule für Bioanalyse der Universität von Carabobo, Venezuela.

Jedes Raster ist ein polierter Bereich, in den der Gravurbereich eingraviert ist. Es besteht aus einem Quadrat mit einer Oberfläche von 9 mm ² und ist intern in 9 Quadrate mit einer Oberfläche von jeweils 1 mm ² unterteilt. Die vier Eckquadrate sind in 16 kleinere Quadrate (0,0625 mm ² Fläche) unterteilt.

Diese Gitter werden durch eine Reihe von Millimeterlinien gebildet, die sich schneiden und perfekt grafische Gitter bilden, die auf die angegebenen Messungen begrenzt sind. Diese Linien wurden mit einer Diamantspitze graviert.

Verbessertes Neubauer-Retikulum. Quelle: Praktischer Leitfaden für Hämatologie der School of Bioanalysis der Universität von Carabobo, Venezuela.

Die vier Seiten entsprechen dem Zählbereich. An diesen Seiten oder Ecken wird die Mehrzahl der Zellen (rote Blutkörperchen und Leukozyten) gezählt, während die Blutplättchen im zentralen Bereich gezählt werden.

Die zentrale Zone hat mehr Unterteilungen, sie besteht aus einem 1 mm ^{2 großen} Quadrat, das in 25 Quadrate mit einer Oberfläche von jeweils 0,04 mm ² unterteilt ist. Diese wiederum sind in 16 Gitter mit einer Fläche von 0,0025 mm ^{2 unterteilt} .

Beschreibung des verbesserten Neubauer-Retikulums. a) Quadrat der Ecken, b) zentrales Quadrat, c) mittleres Quadrat des zentralen Quadrats. Quelle: Praktischer Leitfaden für Hämatologie der School of Bioanalysis der Universität von Carabobo, Venezuela.

Die Zonen "a" und "c" dienen als Unterstützung für die Platzierung eines speziellen Abdeckungsobjekts, das als hämatometrischer Objektträger oder Hämatimeterabdeckung bezeichnet wird.

Die Höhe zwischen Folie und Zählfläche beträgt 0,1 mm. Messungen der Oberfläche der Zählboxen sowie der Höhe der Kammer und der Verdünnung der Probe sind Daten, die für die endgültigen Berechnungen erforderlich sind.

Anwendungen

Es wird zur Zellzählung verwendet. Es ist besonders hilfreich im Bereich der Hämatologie, da es die Zählung der 3 Blutzellenreihen ermöglicht; dh rote Blutkörperchen, weiße Blutkörperchen und Blutplättchen.

Es kann jedoch auch in anderen Bereichen verwendet werden, um beispielsweise Spermien, Sporen, Bakterien oder andere wichtige Gegenstände zu zählen, abhängig von der Art der Probe.

Wie benutzt man?

Probenvorbereitung

Um die Zellzählung durchzuführen, wird im Allgemeinen von einer vorherigen Verdünnung ausgegangen. Beispiel: Um die weißen Blutkörperchen zu zählen, bereiten Sie eine 1:20 Verdünnung mit Turk-Flüssigkeit vor. Die Verdünnung wird gut gemischt, bevor die Pipette geladen und die Neubauer-Kammer montiert wird.

Es gibt Zeiten, in denen eine Verdünnung von 1:20 nicht ausreicht, um zu zählen. Zum Beispiel bei Patienten, die an bestimmten Arten chronischer Leukämien leiden. In diesen Fällen sollten höhere Verdünnungen wie 1: 100 vorgenommen werden.

Wenn andererseits die Anzahl sehr niedrig ist, wie bei schweren Leukopenien, können kleinere Verdünnungen vorgenommen werden, um die Probe zu konzentrieren. Beispiel: Sie können eine 1:10 Verdünnung vornehmen.

Die vorgenommenen Änderungen beeinflussen die Berechnungen.

Neubauer Kammermontage

Die Neubauer-Kammer wird zusammengebaut, indem der hämatometrische Objektträger im zentralen Bereich platziert wird. Beide müssen sehr sauber und trocken sein. Um die Lamelle zu platzieren, wird sie an den Rändern aufgenommen und vorsichtig auf die Kamera fallen gelassen.

Dies wird gefüllt, indem die Spitze einer automatischen Thoma-Pipette oder Pipette in einem Winkel von 35 ° am Rand der Ladezone platziert wird. Die Flüssigkeit wird gleichmäßig abgelassen und die Ladefläche wird durch Kapillarität gefüllt. Dies erfolgt von beiden Seiten, um die beiden Fadenkreuze zu laden.

Die Fadenkreuze sollten nicht überladen werden und ihnen sollte auch keine Flüssigkeit verweigert werden. Die Last muss genau sein. Es ist wichtig, dass die Füllung homogen erfolgt, dh es dürfen keine Blasen vorhanden sein.

Sobald die Kammer zusammengebaut ist, wird sie 2 Minuten ruhen gelassen, damit die Zellen auf den Boden fallen und ihre Visualisierung und Zählung einfacher sind.

Nach der Ruhezeit wird es zur Beobachtung auf den Tisch des Lichtmikroskops montiert. Zuerst wird es mit einem 10X-Objektiv fokussiert und wenn nötig, dann mit 40X.

Um die Visualisierung zu verbessern, wird der Lichtdurchgang vom Mikroskop reduziert. Dazu wird der Kondensator abgesenkt und die Membran leicht geschlossen.

Zählen

Für die Zählung der weißen Blutkörperchen oder Leukozyten muss die gesamte Oberfläche der vier mittleren Eckquadrate und des zentralen Quadrats jedes Retikulums gezählt werden.

Die Zählung beginnt auf dem Quadrat in der oberen linken Ecke. Sie beginnen am ersten Quadrat der ersten Reihe, dh von links nach rechts, bis Sie das gegenüberliegende Ende erreichen.

Dort gehen Sie nach unten und schauen von rechts nach links zurück, bis Sie das andere Ende erreichen, und so weiter. Die Zellen in jedem Gitter werden im Zickzack gezählt. Die 16 Gitter jedes Medianquadrats werden gezählt.

Um zu vermeiden, dass eine Zelle zweimal gezählt wird, gibt es Regeln für die Zellen, die sich an den Grenzlinien jedes Gitters befinden. Zellen in der linken und oberen Zeile werden gezählt und Zellen in der rechten und unteren Zeile werden ignoriert.

Ein manueller Zellenzähler muss verfügbar sein, damit der Bediener die Gerätetaste so oft drückt, wie Zellen beobachtet werden. Mit dem Zähler kann der Bediener zählen, ohne vom mikroskopischen Feld aufblicken zu müssen. Am Ende der Zählung sehen Sie die Gesamtzahl der gezählten Zellen.

Berechnungen

Für die Berechnungen können Sie auf verschiedene Arten vorgehen. Ein einzelnes Raster kann gezählt werden oder beide können gezählt werden und beide werden gemittelt. In diesen beiden Situationen müssen die gezählten Zellen mit einem Faktor multipliziert werden, der in diesem Fall 40 wäre. Somit wird die Gesamtzahl pro mm ^{3 erhalten} .

Wenn jedoch die beiden Gitter gezählt werden und der Durchschnitt nicht ermittelt wird, muss er mit einem anderen Faktor multipliziert werden, in diesem Fall mit 20.

-Multiplikations-Faktor

So wird der Multiplikationsfaktor berechnet.

Bei den Berechnungen werden verschiedene Daten berücksichtigt, darunter der Verdünnungstiter, die Höhe der Kammer und die gezählte Fläche.

Verdünnung

Die verwendete Standardverdünnung beträgt 1:20 für die Leukozytenzahl.

Kammerhöhe

Die Höhe zwischen der Kammer und dem Blutzellenblatt beträgt 0,1 mm.

Zählfläche

Wenn 5 Quadrate mit einer Fläche von 1 mm ² gezählt werden , bedeutet dies, dass die gesamte Zählfläche ⁵ mm ² beträgt . Diese Daten müssen mit der Höhe der Kammer multipliziert werden, um das gezählte Gesamtvolumen zu erhalten. Das heißt, 5 mm ² × 0,1 mm = 0,5 mm ³ .

Formeln und Berechnungen

Mit den Daten, die wir haben, heißt es:

Wenn in 0,5 mm ³ - gibt es --- Anzahl der gezählten Zellen

In 1 mm ³ --- gibt es - X n ° Zellen

X Anzahl der Zellen = (Anzahl der Zellen gezählt x 1) / 0,5 mm ³

Aber auch die Verdünnung muss berücksichtigt werden. Daher lautet die Formel wie folgt:

(Anzahl der gezählten Zellen x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Zusammenfassend kann die Anzahl der gezählten Zellen mit 40 multipliziert werden. Somit wird der Wert der Leukozyten pro mm ^{3 erhalten} .

Wenn die zwei Fadenkreuze gezählt werden, werden die Daten für den gezählten Bereich geändert, was in diesem Fall 10 Quadrate, dh 10 mm ^{2, wäre} . Und ein Gesamtvolumen von 1 mm3. Die Formel wäre:

(Anzahl der gezählten Zellen x 1) x 20/1 mm ³

Daher wäre in diesem Fall der Multiplikationsfaktor 20.

Fehler

-Wenn die Kamera beim Laden mit Flüssigkeit überschritten oder überschritten wird, variiert die Höhe der Kamera. Dies führt dazu, dass die Anzahl höher ist als die tatsächliche. Wenn Sie versuchen, den Überschuss mit Gaze oder Baumwolle zu entfernen, ist dies ein großer Fehler. Diese Aktion bewirkt, dass sich die Zellen konzentrieren und die Anzahl erhöht.

-Wenn es schlecht geladen ist, ist die Anzahl niedriger als die reale.

-Wenn die Kamera montiert ist und trocknen darf, kann nicht mehr gezählt werden, da dies zu falschen Ergebnissen führt.

-Wenn die Probenverdünnung vor dem Beladen der Kammer nicht gut gemischt wird, besteht die Gefahr eines Messfehlers, da die Zellen nicht homogen verteilt sind. Daher gibt es eine niedrigere oder höhere Konzentration von Zellen, abhängig davon, ob die Probe von der Oberfläche der Flüssigkeit bzw. vom Boden des Röhrchens entnommen wird.

-Das Vorhandensein von Blasen verringert die Menge an Flüssigkeit, die in das Retikulum gelangen muss, was die korrekte Visualisierung und Verteilung der Zellen beeinträchtigt. All dies beeinflusst die Ergebnisse erheblich.

- Schauen Sie beim Zählen nicht vom Mikroskop auf, bis jedes große Quadrat fertig ist, um nicht verloren zu gehen.

- Ein Grund für einen Fehler ist das Kippen der Kamera nach der Montage. Aus diesem Grund muss der Tisch des Mikroskops vorsichtig angehoben werden.

Empfehlung

Wenn Sie aus irgendeinem Grund eine Abnormalität in der Füllung der Kammer feststellen, wird empfohlen, diese Zubereitung zu zerlegen, die Kammer zu reinigen und von Grund auf neu zusammenzubauen.

Gehen Sie beim Reinigen der Kamera vorsichtig vor, um Kratzer am Fadenkreuz zu vermeiden. Beachten Sie andererseits, dass der hämatometrische Objektträger empfindlich und zerbrechlich ist. Unsachgemäße Handhabung kann es brechen.

Stellen Sie vor dem Zählen sicher, dass die Zellen gut verteilt sind. Eine ungleichmäßige Verteilung der Zellen tritt durch schlechtes Mischen oder Verdünnen der Probe auf. In diesem Fall muss die Montage wiederholt werden.

Eine Möglichkeit, festzustellen, ob die Zellen gut verteilt sind, besteht darin, die Anzahl jedes großen Quadrats zu vergleichen. Die Anzahl der für jedes Quadrat gezählten Zellen sollte sich nicht übertrieben von einem zum anderen unterscheiden.

-Wenn die Anzahl der weißen Blutkörperchen über 50.000 mm ^{3 liegt, ist es} ratsam, die Zählung zu wiederholen und eine größere Verdünnung vorzunehmen.

-Wenn Sie die Verdünnung ändern, müssen Sie den Multiplikationsfaktor neu berechnen, da dies die Formel beeinflusst.

Verweise

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