VOGEL-JOHNSON-AGAR: BEGRÜNDUNG, VORBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Der Agar Vogel-Johnson ist eine feste mittelselektive und differentielle Kultur, die speziell für die Isolierung von Staphylococcus aureus formuliert wurde. Dieses Medium wurde 1960 von Vogel und Johnson aus der Modifikation von Telluritglycin-Agar hergestellt, der 1955 von Zebovitz, Evans und Niven formuliert wurde.

Die Modifikation bestand darin, die im Medium vorhandene Mannitkonzentration zu erhöhen und einen pH-Indikator einzubauen. Die derzeitige Formel besteht aus Triptein, Hefeextrakt, Mannit, Dikaliumphosphat, Lithiumchlorid, Glycin, Phenolrot, Agar, 1% iger Kaliumtelluritlösung und Wasser.

Quelle: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Es sollte beachtet werden, dass es andere Medien gibt, die wie Vogel-Johnson-Agar für die Isolierung von S. aureus selektiv sind, wie salziger Mannit-Agar und Baird Parker-Agar. In diesem Sinne könnte man sagen, dass die Grundlage von Vogel-Johnson-Agar eine Mischung aus salzigem Mannit-Agar und Baird Parker-Agar ist.

Im ersten Fall werden die S. aureus-Kolonien dadurch unterschieden, dass das Mannit fermentiert und der pH-Indikator auf gelb gestellt wird. Andererseits ist S. aureus im zweiten Fall dadurch gekennzeichnet, dass Tellurit zu Tellur reduziert und graue bis schwarze Kolonien gebildet werden. Beide Eigenschaften werden in Vogel-Johnson-Agar beobachtet.

Dieses Medium ist wie seine Gegenstücke zum Nachweis von Staphylococcus aureus in Lebensmittelproben, zur Hygienekontrolle von Industrieprodukten und in klinischen Proben nützlich.

Basis

Nährstoffversorgung

Vogel-Johnson-Medium enthält Triptein und Hefeextrakt; Beide Substanzen liefern langkettige Aminosäuren, die als Kohlenstoff- und Stickstoffquellen dienen, die für das Bakterienwachstum notwendig sind. Bakterien, die in diesem Medium wachsen können, nehmen die Nährstoffe aus diesen Substanzen auf.

Selektive Leistung

Vogel-Johnson-Agar kann das Wachstum von gramnegativen Bakterien und sogar einiger grampositiver Bakterien hemmen und die Entwicklung von Koagulase-positiven Staphylokokken begünstigen. Die hemmenden Substanzen sind Kaliumtellurit, Lithiumchlorid und Glycin.

Differenzleistung

Die Substanzen, die dieses Differenzmedium ausmachen, sind Mannit und Kaliumtellurit. Mannit ist ein Kohlenhydrat, und wenn es fermentiert wird, entstehen Säuren, die das Medium von rot nach gelb drehen lassen, was dank des Vorhandenseins des pH-Indikators für rotes Phenol geschieht.

Während das farblose Tellurit, wenn es zu freiem metallischem Tellur reduziert wird, eine dunkelgraue bis schwarze Farbe annimmt.

Staphylococcus aureus fermentiert Mannit und reduziert Tellurit zu Tellur. Aus diesem Grund sind die typischen Kolonien von S. aureus in diesem Medium grau oder schwarz, umgeben von einem gelben Medium.

Bakterien, die in diesem Medium wachsen und Tellurit nicht reduzieren oder Mannit fermentieren, bilden transparente Kolonien, die von einem rot gefärbten Medium umgeben sind, das aufgrund der Alkalisierung des Mediums durch Verwendung von Peptonen noch intensiver als die ursprüngliche Farbe ist.

Andererseits wachsen Bakterien, die Tellurit reduzieren, aber Mannit nicht fermentieren, als graue oder schwarze Kolonien, die von einem tiefroten Medium umgeben sind.

Wenn das Medium ohne Zugabe von Kaliumtellurit hergestellt würde, würden sich S. aureus-Kolonien als gelbe Kolonien entwickeln, die von gelbem Medium umgeben sind, wie in salzigem Mannitagar.

Osmotisches Gleichgewicht und Verfestigungsmittel

Dikaliumphosphat hält das osmotische Gleichgewicht des Mediums aufrecht und stellt den pH-Wert auf Neutralität ein. 7.2. Während der Agar dem Kulturmedium die feste Konsistenz verleiht.

Vorbereitung

Kaliumtelluritlösung 1% w / v

Diese Lösung ist nicht im dehydrierten Medium enthalten, da sie in einem Autoklaven nicht sterilisiert werden kann. Aus diesem Grund wird es separat hergestellt und dem bereits sterilisierten Medium zugesetzt.

Einige Handelshäuser verkaufen die gebrauchsfertige 1% ige Kaliumtelluritlösung. Wenn Sie sich im Labor vorbereiten möchten, gehen Sie wie folgt vor:

1,0 g Kaliumtellurit abwiegen und 100 ml destilliertes Wasser abmessen. Löse das Kaliumtellurit in einem Teil Wasser und vervollständige dann die Wassermenge bis 100 ml erreicht sind. Sterilisieren Sie die Lösung durch Filtration.

Vogel-Johnson-Agar-Basismedium

60 g des dehydrierten Mediums werden abgewogen und in 1 Liter destilliertem Wasser gelöst. Die Mischung wird zum Kochen erhitzt, um die vollständige Auflösung zu unterstützen. Während des Auflösungsprozesses wird das Medium häufig gerührt.

Sterilisieren Sie im Autoklaven bei 15 Pfund Druck und 121 ° C für 15 Minuten. Aus dem Autoklaven nehmen und ruhen lassen, bis das Medium eine Temperatur von ca. 45 bis 50 ° C erreicht. 20 ml der zuvor hergestellten 1% igen Kaliumtelluritlösung zugeben.

Mischen und in sterile Petrischalen gießen. Erstarren lassen und invertiert auf Plattenhaltern bestellen, um sie später bis zur Verwendung im Kühlschrank zu lagern.

Der endgültige pH-Wert des hergestellten Mediums sollte 7,2 ± 0,2 betragen.

Warten Sie vor der Aussaat einer Probe, bis die Platte Raumtemperatur erreicht hat.

Die Farbe des vorbereiteten Mediums ist rot.

Verwenden

Obwohl es zur Isolierung von S. aureus in jeder Art von Proben verwendet werden kann, wird es hauptsächlich zur mikrobiologischen Analyse von pharmazeutischen Produkten, Kosmetika und Lebensmitteln verwendet.

Es wird empfohlen, dass das Inokulum dicht ist. Die Aussaat kann durch Ritzen mit einem Platingriff oder durch Oberfläche mit einem Drigalski-Spatel erfolgen.

Die Platten werden 24 bis 48 Stunden aerob bei 35-37 ° C inkubiert.

QA

Die folgenden Kontrollstämme können verwendet werden, um eine Qualitätskontrolle auf Vogel-Johnson-Medium durchzuführen:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 oder Proteus mirabilis ATCC 43071.

Das erwartete Ergebnis ist wie folgt: Für S. aureus-Stämme ist das Wachstum mit schwarzen Kolonien, die von gelbem Medium umgeben sind, zufriedenstellend. Für S. epidermidis regelmäßiges Wachstum mit durchscheinenden oder schwarzen Kolonien, umgeben von rotem Medium.

Ebenso wird eine vollständige Hemmung für E. coli und eine teilweise oder vollständige Hemmung für Proteus mirabilis erwartet; Wenn es wächst, wird es sparsam sein und die Kolonien werden schwarz sein, umgeben von einer roten Farbe.

Verweise

1. BD Laboratories. VJ (Vogel und Johnson Agar). 2006. Verfügbar unter: bd.com
2. Britannia Laboratories. Vogel-Johnson-Agar. 2015. Verfügbar unter: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Kaliumtellurit. 2015. Verfügbar unter: britania.com
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5. Vogel-Johnson-Agar-Basis. Merck Microbiology Manual. 12. Auflage, S. 502-503. Verfügbar unter: Benutzer / Team / Downloads
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7. Venezolanischer Standard Covenin 1292-89. (1989). Lebensmittel. Isolierung und Zählung von Staphylococcus aureus. Verfügbar unter: sencamer.gob.ve