BLUTAGAR: BEGRÜNDUNG, VERWENDUNG UND VORBEREITUNG - BIOLOGIE - 2025

Der Blutagar ist ein mit festem Kulturmedium angereichertes Differential, jedoch nicht selektiv. Es wird zur Gewinnung und zum Wachstum einer Vielzahl von Mikroorganismen aus klinischen Proben oder für Subkulturen verwendet.

Für die Aussaat der meisten im Labor erhaltenen klinischen Proben sollte klassischer Blutagar enthalten sein. mit Ausnahme von Stuhlproben, bei denen dies nicht sinnvoll ist, sofern dies nicht mit bestimmten Modifikationen vorbereitet wurde.

Blutagarplatte

Dieses Kulturmedium besteht im Wesentlichen aus einem angereicherten Basisagar und 5% Blut. Die Agar-Base kann je nach Bedarf variieren, besteht jedoch hauptsächlich aus Peptonen, Aminosäuren, Vitaminen, Fleischextrakt, Natriumchlorid und Agar.

Für Blut ist normalerweise Kontakt mit einem Vivarium erforderlich, um Blut von Tieren wie Schafen, Kaninchen oder Pferden zu erhalten. Dies ist jedoch nicht immer möglich und manchmal wird menschliches Blut verwendet.

Blutagarmedium kann im Labor hergestellt oder von speziellen Unternehmen vorgefertigt gekauft werden. Die Herstellung dieses Mediums ist eine der empfindlichsten. Unachtsamkeiten bei der Herstellung führen zu einer kontaminierten Charge.

Aus diesem Grund müssen alle möglichen Vorsichtsmaßnahmen getroffen werden, und am Ende muss eine Qualitätskontrolle durchgeführt werden, indem bei 100 vorbereiteten 100 Platten bei 37 ° C 1 Platte inkubiert wird.

Basis

Auf Blutagar kultivierter Staphylococcus aureus. Nathan Reading auf Flickr Nathan R. auf Twitter über Wikimedia Commons Es wurde bereits erwähnt, dass Blutagar die Eigenschaft hat, ein angereichertes, differenzielles und nicht selektives Medium zu sein. Die Basis für jede dieser Eigenschaften wird unten erläutert.

Blutagar ist ein angereichertes Medium, da es 5-10% Blut auf Agarbasis als Hauptzusatz enthält. Beide Verbindungen enthalten viele Nährstoffe und diese Eigenschaft ermöglicht es den meisten kultivierbaren Bakterien, darin zu wachsen.

Dieses Wachstum erfolgt ohne Einschränkung; aus diesem Grund ist es nicht selektiv. Wenn diesem Medium jedoch Verbindungen zugesetzt werden, die das Wachstum einiger Mikroorganismen verhindern und das anderer begünstigen, wird es selektiv. Dies ist der Fall, wenn bestimmte Arten von Antibiotika oder Antimykotika hinzugefügt werden.

Ebenso ist Blutagar ein Differenzialmedium, da es die Unterscheidung von drei Arten von Bakterien ermöglicht: beta-hämolytisch, alpha-hämolytisch und gamma-hämolytisch.

Beta-Hämolytika sind solche, die rote Blutkörperchen vollständig lysieren oder abbauen können und einen klaren Lichthof um die Kolonien bilden. Daher produzieren sie eine ß- oder ß-Hämolyse, und die Mikroorganismen werden als ß-hämolytisch bezeichnet.

Beispiele für ß-hämolytische Bakterien sind Streptococcus pyogenes und Streptococcus agalactiae.

Alpha-Hämolytika sind solche, die eine partielle Hämolyse durchführen, bei der das Hämoglobin zu Methämoglobin oxidiert wird und eine grünliche Färbung um die Kolonien herum erzeugt. Dieses Phänomen ist als α- oder α-Hämolyse bekannt, und Bakterien werden als α-hämolytisch klassifiziert.

Beispiele für α-hämolytische Bakterien sind Streptococcus pneumoniae und Streptococcus der Viridans-Gruppe.

Schließlich gibt es die sogenannten gamma-hämolytischen oder nicht-hämolytischen Bakterien. Diese wachsen auf dem Agar, ohne Änderungen daran zu erzeugen, ein Effekt, der als γ-Hämolyse bekannt ist, und die Mikroorganismen sind γ-hämolytisch.

Beispiel für γ-hämolytische Bakterien: einige Stämme von Streptococcus der Gruppe D (Streptococcus bovis und Enterococcus faecalis).

Anwendungen

Das Blutagar-Kulturmedium ist eines der am häufigsten im mikrobiologischen Labor verwendeten.

Zu den Mikroorganismen, die im Blutagarmedium wachsen können, gehören: streng aerobe, fakultative, mikroaerophile, anaerobe, grampositive oder gramnegative Bakterien, schnell wachsende oder langsam wachsende Bakterien.

Es wachsen auch einige ernährungsphysiologisch anspruchsvolle oder anspruchsvolle Bakterien sowie Pilze und Hefen. Ebenso ist es nützlich, um Stämme zu subkultivieren oder zu reaktivieren, die metabolisch sehr schwach sind.

Die Wahl der Blutgruppe und des Basisagars hängt jedoch von dem wahrscheinlichen Mikroorganismus ab, von dem vermutet wird, dass er sich erholt, und von der Verwendung, für die die Platte verwendet werden soll (Kultur oder Antibiogramm).

Wahl der Blutgruppe

Das Blut kann Lamm, Kaninchen, Pferd oder Mensch sein.

Am meisten empfohlen wird mit einigen Ausnahmen das Lammblut. Zum Beispiel zur Isolierung von Haemophilus-Arten, bei denen das empfohlene Blut Pferde- oder Kaninchenblut ist, da Lammblut Enzyme enthält, die Faktor V hemmen.

Das am wenigsten empfohlene ist menschlich, wird jedoch am häufigsten verwendet, vielleicht weil es am einfachsten zu bekommen ist.

Das Blut muss defibriniert, ohne Zusatzstoff und von gesunden Tieren gewonnen werden. Bei der Verwendung von menschlichem Blut müssen verschiedene Faktoren berücksichtigt werden:

Wenn das Blut von Personen stammt, die bakterielle Infektionen hatten, haben sie spezifische Antikörper. Unter diesen Bedingungen ist es wahrscheinlich, dass das Wachstum einiger Bakterien gehemmt wird.

Wenn es aus der Blutbank gewonnen wird, enthält es Citrat und bestimmte Bakterien wachsen möglicherweise nicht in seiner Gegenwart. Wenn andererseits das Blut von Patienten stammt, die Antibiotika einnehmen, kann das Wachstum anfälliger Bakterien gehemmt werden.

Und wenn das Blut von einem Diabetiker stammt, stört die überschüssige Glukose die ordnungsgemäße Entwicklung von Hämolysemustern.

Wahl des Basisagartyps

Der zur Herstellung von Blutagar verwendete Basisagar kann sehr breit sein. Unter diesen sind: Nähragar, Hirnherzinfusionsagar, Trypticase-Soja-Agar, Müeller-Hinton-Agar, Thayer-Martin-Agar, Columbia-Agar, Brucella-Agar, Campylobacter-Agar usw.

Verwendung von Blutagar gemäß dem für seine Herstellung verwendeten Basismedium

Nährstoff-Agar

Diese Base wird am wenigsten verwendet, da sie hauptsächlich nicht anspruchsvolle Bakterien wie enterische Bazillen, Pseudomonas sp., S. aureus, Bacillus sp. Es wird nicht empfohlen, Streptococcus zu isolieren.

Gehirn-Herz-Infusionsagar (BHI)

Es ist eines der am häufigsten als Basis für Blutagar verwendeten, da es die notwendigen Nährstoffe für das Wachstum der meisten Bakterien enthält, einschließlich Streptococcus sp und anderer anspruchsvoller Bakterien. Obwohl nicht zur Beobachtung von Hämolysemustern geeignet.

Lammblut wird im Allgemeinen mit dieser Basis verwendet.

Es können auch Blutagarvarianten hergestellt werden, bei denen andere Verbindungen zugesetzt werden, um bestimmte Mikroorganismen zu isolieren. Zum Beispiel kann Brain Heart Infusion Agar, ergänzt mit Kaninchenblut, Cystin und Glucose, verwendet werden, um Francisella tularensis zu isolieren.

Während es mit Cystin-Tellurit zur Isolierung von Corynebacterium diphteriae nützlich ist. Menschen- oder Lammblut kann verwendet werden.

Bei der ersten Beta-Hämolyse wird der Halo als schmaler Lichthof angesehen, während bei der zweiten der Lichthof viel breiter wird.

Ebenso wird diese Base zusammen mit Bacitracin, Maisstärke, Pferdeblut und anderen Anreicherungszusätzen (IsoVitaleX) zur Isolierung der Gattung Haemophilus sp aus Atemproben verwendet.

Wenn die Kombination der Antibiotika Chloramphenicol-Gentamicin oder Penicillin-Streptomycin mit Pferdeblut zugesetzt wird, ist dies auch ideal für die Isolierung anspruchsvoller pathogener Pilze, selbst bei einer höheren Ausbeute als Sabouraud-Glucoseagar. Es ist besonders nützlich bei der Isolierung von Histoplasma capsulatum.

Trypticase-Soja-Agar

Diese Basis wird am meisten empfohlen, um das Hämolysemuster besser beobachten und diagnostische Tests wie Optoquin Taxa und Bacitracin durchführen zu können. Es ist der klassische Blutagar, der routinemäßig verwendet wird.

Auf dieser Basis können Sie auch den speziellen Blutagar für Corynebacterium diphteriae mit Cystin-Tellurit und Lammblut herstellen .

Ebenso ist die Kombination dieses Agars mit Lammblut plus Kanamycin-Vancomycin ideal für das Wachstum von Anaerobier, insbesondere Bacteroides sp.

Müeller Hinton Agar

Diese mit Blut ergänzte Base wird zur Durchführung des Antibiogramms anspruchsvoller Mikroorganismen wie Streptococcus sp.

Es ist auch nützlich für die Isolierung von Bakterien wie Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar

Dieses Medium ist ideal als Basis für Blutagar, wenn der Verdacht auf die Gattung Neisseria besteht, insbesondere für Neisseria meningitidis, da N. gonorrhoeae nicht auf Blutagar wächst.

Es wird auch verwendet, um die Anfälligkeit für Neisseria meningitidis zu testen.

Columbia-Agar

Diese Basis eignet sich hervorragend zum Aussäen von Magenbiopsien für Helicobacter pylori.

Das Medium wird durch Zugabe von 7% mit Antibiotika (Vancomycin, Trimethoprim, Amphotericin B und Cefsulodin) defibriniertem Lammblut hergestellt, um das Wachstum anderer möglicherweise vorhandener Bakterienarten einzuschränken.

Dieselbe Base, die mit menschlichem oder Lammblut, Nalidixinsäure und Colistin ergänzt ist, ist zur Isolierung von Gardnerella vaginalis nützlich. Es ist auch ideal zur Beurteilung der antimikrobiellen Empfindlichkeit gegenüber Antibiotika desselben Mikroorganismus.

Darüber hinaus wird es zur Herstellung von Blutagar zur Kultivierung von Anaerobier unter Zusatz von Aminoglycosiden und Vancomycin verwendet.

Diese Basis ermöglicht die korrekte Beobachtung von Hämolysemustern.

Brucella-Agar

Dieses Medium, das zusammen mit Vitamin K als Basis für Blutagar verwendet wird, ist ideal für die Kultivierung anaerober Bakterien. In diesem Fall wird die Verwendung von Lammblut empfohlen.

Campylobacter-Agar

Campylobacter-Agar, ergänzt mit 5% Schafblut und 5 Antibiotika (Cephalothin, Amphotericin B, Trimethoprim, Polymyxin B und Vancomycin), ist das Medium, das zur Isolierung von Campylobacter jejuni in Stuhlproben verwendet wird.

Vorbereitung

Jedes Geschäftshaus bringt die Anleitung mit, einen Liter Kulturmedium auf der Rückseite des Behälters zuzubereiten. Entsprechende Berechnungen können durchgeführt werden, um die gewünschte Menge in Abhängigkeit von dem ausgewählten Basisagar herzustellen.

Wiegen und auflösen

Der Basisagar wird dehydratisiert (Pulver), daher muss er in destilliertem Wasser gelöst werden, das auf pH 7,3 eingestellt ist.

Die durch den gewählten Basisagar angegebene Menge wird gewogen und in der entsprechenden Menge Wasser in einem Kolben gelöst, dann bei mäßiger Hitze erhitzt und mit Drehbewegungen gemischt, bis das gesamte Pulver gelöst ist.

Sterilisieren

Nach dem Auflösen 20 Minuten in einem Autoklaven bei 121 ° C sterilisieren.

Blutaggregat

Beim Verlassen des Autoklaven wird der Kolben abkühlen gelassen, bis die Temperatur zwischen 40 und 50 ° C liegt; Es ist eine Temperatur, die die menschliche Haut unterstützt und gleichzeitig hat sich der Agar noch nicht verfestigt.

Dazu wird das Fläschchen mit der Hand berührt. Wenn die Hitze tolerierbar ist, ist es die ideale Temperatur, um die entsprechende Menge defibrinierten Blutes (50 ml pro Liter Agar) zuzugeben. Zum Homogenisieren vorsichtig mischen.

Der Durchgang der Blutaggregation ist entscheidend, denn wenn dies bei sehr heißem Medium geschieht, werden die roten Blutkörperchen abgebaut und das Medium wird nicht zur Beobachtung der Hämolyse verwendet.

Wenn es zu kalt hinzugefügt wird, verklumpt es und die Oberfläche des Mediums ist nicht glatt, um eine ordnungsgemäße Bewertung zu ermöglichen.

In Petrischalen gießen

Sofort nach dem Homogenisieren des Blutes in sterilen Petrischalen servieren. In jede Petrischale werden ca. 20 ml gegossen. Dieser Vorgang wird in einer Laminarströmungshaube oder in der Nähe des Brenners durchgeführt.

Beim Servieren des Blutagars in den Petrischalen dürfen keine Luftblasen auf der Oberfläche der Platte verbleiben. In diesem Fall wird die Flamme des Bunsenbrenners schnell über die Platte geleitet, um sie zu beseitigen.

Die Platten werden erstarren gelassen und bis zur Verwendung in einem Kühlschrank (2-8 ° C) umgedreht gelagert. Vor der Verwendung der Blutagarplatten müssen diese temperiert werden (Raumtemperatur erreichen), damit sie ausgesät werden können.

Die vorbereiteten Teller halten ca. 1 Woche.

Verweise

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