Der Agar Salmonella Shigella, auch als SS-Agar bekannt, ist ein selektives und differenzielles Medium, das mäßig für die Isolierung enteropathogener Bakterien der Gattungen Salmonella und Shigella entwickelt wurde, beides Umweltproben wie klinische.
SS-Agar hat eine komplexe Zusammensetzung; Es besteht aus Fleischextrakt, Pepton, Laktose, Gallensalzen, Natriumcitrat, Natriumthiosulfat, Eisen (III) -citrat, Agar, Neutralrot, hellgrünem und destilliertem Wasser. Aufgrund seiner großen Selektivität können Proben mit reichlich Mischflora ausgesät werden.
SS-Agar mit Kolonien von Salmonella sp. Quelle: Manurx27, aus Wikimedia Commons
In mikrobiologischen Labors wird das Salmonella-Shigella-Medium häufig verwendet, um das Vorhandensein von Salmonella und Shigella in Durchfall-Stuhlproben, Abwasser, Trinkwasser und Lebensmitteln zu untersuchen.
Manchmal ist es notwendig, Voranreicherungsbrühe (Laktosebrühe) und Anreicherungsbrühe (Selenit-Cystin-Brühe) zu verwenden, um Salmonellenstämme zu gewinnen.
Diese Schritte sind erforderlich, wenn der Verdacht auf Salmonellen in sehr geringer Menge besteht oder wenn der Stamm durch für die industrielle Produktion typische Verfahren, hauptsächlich verarbeitete Lebensmittel, missbraucht werden kann. Es ist auch ratsam, Stuhlproben von Patienten anzureichern, die mit Antibiotika behandelt wurden.
Anschließend kann die angereicherte Brühe auf Salmonella-Shigella-Agar und andere ähnliche Medien wie Xylose-Agar, Lysin-Desoxycholat (XLD) und enterischen Hektoen-Agar (HE) ausgesät werden.
Basis
Jede Komponente des Salmonella-Shigella-Kulturmediums hat eine spezifische Funktion, und die Mischung als Ganzes verleiht ihr die Eigenschaften, die sie charakterisieren.
Nährende Kraft
Der Fleischextrakt und das Pepton (verdaut mit Kasein und tierischem Gewebe) liefern die erforderlichen Nährstoffe (Stickstoff, Kohlenstoff und Vitamine) für die Entwicklung von Mikroorganismen, die den Rest der Komponenten vertragen.
Konsistenz
Der Agar-Agar ist dafür verantwortlich, dem Medium die feste Konsistenz zu verleihen.
Selektiv
Dieses Medium ist hochselektiv, da es Gallensalze, Natriumcitrat und hellgrün enthält. Daher hemmt es das Wachstum aller grampositiven Bakterien und der meisten gramnegativen Bazillen, einschließlich einiger Coliformer.
Während Bakterien der Gattung Salmonella und einige Shigella-Stämme diese Verbindungen unterstützen.
Hauptsächlich ist die Gattung Salmonella sehr resistent gegen Gallensalze, so dass sie in der Gallenblase einiger Trägerpatienten leben können, die die Bakterien ständig in ihrem Stuhl ausscheiden.
Differential
Laktose ist das fermentierbare Kohlenhydrat, mit dessen Hilfe laktosefermentierende Stämme von nicht fermentierenden Stämmen unterschieden werden können. Diese Eigenschaft wird durch das Vorhandensein des pH-Indikators belegt, der in diesem Medium Phenolrot ist.
Laktosefermentierende Stämme ergeben rote Kolonien, während nicht fermentierende Stämme farblos sind. Diese Eigenschaft ist wichtig, da Salmonellen und Shigellen keine Laktose fermentieren.
Andererseits enthält dieses Medium Natriumthiosulfat als Sulfidquelle und Eisen (III) -citrat als Eisenquelle. Beide Verbindungen sind in der Lage, Bakterien zu unterscheiden, die Schwefelwasserstoff produzieren können. Diese reagieren unter Bildung eines sichtbaren, unlöslichen schwarzen Eisensulfidniederschlags.
Diese Eigenschaft kommt bei einigen Stämmen der Gattung Salmonella vor. Normalerweise sind ihre Kolonien flach und farblos mit einem schwarzen Punkt in der Mitte. Der Rest der Salmonellen produziert kein H 2 S und entwickelt sich als farblose Kolonien.
Andererseits sind Kolonien der Gattung Shigella flach und ohne Schwärzung farblos.
Vorbereitung
Dieses Medium ist sehr einfach herzustellen.
63 g des dehydrierten Handelsmediums werden abgewogen und in einem Liter destilliertem Wasser gelöst. Die Lösung erhitzen und umrühren. Die Mischung kann bis zu Minuten kochen.
Dieses Medium darf nicht autoklaviert werden. Nach dem Auflösen wird es direkt auf einfach oder doppelt sterilen Platten serviert.
Wenn sie sich verfestigen, werden sie umgekehrt auf Blutplättchen angeordnet und bis zur Verwendung im Kühlschrank (2-8 ° C) aufbewahrt.
Das Medium sollte nach der Herstellung einen pH-Wert von 7,2 ± 0,2 und eine orangerote Farbe haben.
Es ist wichtig, dass sich die Platten vor dem Aussäen der Proben erwärmen. Die Originalprobe kann direkt ausgesät werden, wobei Material auf einen Teil des Agars abgegeben und von dort aus gestreift wird.
Bei Verwendung von angereicherten Brühen einen Teil der Selenitbrühe passieren und mit einem Drigalski-Spatel säen.
24 Stunden bei 37 ° C in Aerobiose inkubieren.
Beachten Sie, dass die Anzahl der zu wiegenden Gramm und der endgültige pH-Wert des Mediums von Geschäft zu Geschäft unterschiedlich sein können. Die mittlere Basis bringt immer die Indikationen für ihre Vorbereitung.
Verwenden
Es wird häufig in der Stuhlkulturanalyse und bei der mikrobiologischen Untersuchung von Abwasser-, Trinkwasser- und Lebensmittelproben verwendet.
Häufig werden Doppelplatten hergestellt, auf der einen Seite wird Salmonella-Shigella-Agar platziert und auf der anderen XLD-Agar.
Einschränkungen
-Einige Shigella-Stämme wachsen in diesem Medium nicht. Daher wird es für die primäre Isolierung dieser Gattung nicht empfohlen.
- Nicht jede transparente Kolonie mit einem schwarzen Zentrum weist auf Salmonellen hin. Biochemische Tests müssen durchgeführt werden, um eine korrekte Identifizierung zu ermöglichen, da die Kolonien einiger Proteus-Stämme nicht von denen von Salmonellen zu unterscheiden sind.
-Das dehydrierte Medium muss sich der Umwelt aussetzen, da es sehr hygroskopisch ist. Daher muss es in einer trockenen und gut geschlossenen Umgebung aufbewahrt werden. Sehr kurz geöffnet.
- Im Laufe der Zeit können die Gallensalze im Medium ausfallen und ein Bild ähnlich einer Matte im Agar bilden, dies hat jedoch keinen Einfluss auf die Ergebnisse.
-Einige Shigella-Stämme können Laktose langsam fermentieren.
QA
Um zu beweisen, dass das Medium richtig funktioniert, ist es ratsam, bekannte oder zertifizierte Kontrollstämme zu pflanzen und zu beobachten, ob das Wachstum die erwarteten Eigenschaften erfüllt.
Hierzu können Stämme von E. coli, Enterobacter sp., Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium oder Enterococcus faecalis verwendet werden.
Die erwarteten Ergebnisse sind:
Enterobacter und Klebsiella ------ große Kolonien und rote oder rosa Schleimhäute.
Shigella flexneri ---------- transparente oder farblose flache Kolonien.
Salmonella typhimurium ------ farblose Kolonien mit schwarzen Zentren.
Enterococcus faecalis -------- totale Hemmung.
Verweise
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Salmonella-Shigella-Agar. 2009.Verfügbar unter: f-soria.es
- BD Labor. BD Salmonella-Shigella-Agar. 2013. Verfügbar unter: bd.com
- Britannia Laboratories. Salmonella-Shigella-Agar. 2015. Verfügbar unter: britanialab.com
- Valtek-Diagnose. Salmonella-Shigella-Agar (SS-Agar). 2010. Verfügbar unter: andinamedica.com
- Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiologische Diagnose. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentinien.
- Koneman E., Allen S., Janda W., Schreckenberger P., Winn W. (2004). Mikrobiologische Diagnose. 5. Aufl. Editorial Panamericana SA Argentinien.