MAISMEHLAGAR: HINTERGRUND, ZUBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Der Maismehlagar ist ein festes Kulturmedium mit geringer Nährleistung, das zur Subkultur bestimmter Pilze und zum Nachweis der Chlamydosporen in Stämmen des Candida albicans-Komplexes nützlich ist. Auf Englisch ist es als Maismehlagar bekannt.

Das herkömmliche Maismehlmedium hat eine sehr einfache Zusammensetzung, es enthält Maismehl, Agar-Agar und Wasser. Aufgrund seines geringen Nährstoffgehalts ist es ideal für die Erhaltung von Pilzstämmen über einen längeren Zeitraum, insbesondere von schwarzen Pilzen.

A. Grafische Darstellung des Candida albicans-Komplexes auf Maismehlagar. B. Chlamydosporen des Candida albicans-Komplexes, unter dem Mikroskop gesehen, gebildet auf Maismehlagar. Quelle: A. GrahamColm / B. Von: CDC / Dr. William Kaplan, mit freundlicher Genehmigung der Public Health Image Library.

Die Sporulation des Candida albicans-Komplexes wird in diesem Medium bevorzugt, wenn 1% Tween 80 während der Herstellung des Agars zugesetzt wird. Die Bildung von Chlamydosporen ist charakteristisch für diese Art und praktisch die einzige, die den Menschen betrifft.

Es gibt andere Arten, die Chlamydosporen bilden, aber es ist unwahrscheinlich, dass sie Menschen betreffen, wie Candida australis, die in Pinguinkot vorkommt, oder C. clausenii, ein selten vorkommender Saprophyt. Ebenso könnten ausnahmsweise die Arten C. stellatoidea und C. tropicalis sie bilden.

Andererseits begünstigt die Zugabe von Glucose zum Maismehlmedium die Bildung von Pigmenten in Trichophytom rubrum-Stämmen.

Es ist wichtig hervorzuheben, dass es Pilze gibt, die in Maismehlagar keine Hyphen oder Pseudohyphen bilden, wie Cryptococcus neoformans, die sich von anderen Gattungen unterscheiden.

Maismehlagar kann zu Hause im Labor hergestellt werden oder es können auch kommerzielle Medien verwendet werden.

Basis

Maismehl ist das Substrat, Agar ist das Verfestigungsmittel und Wasser ist das Lösungsmittel.

Maismehlagar kann mit Tween 80 (Sorbitanmonooleat oder Polysorbatpolyester 80) ergänzt werden. Diese Verbindung reduziert die Oberflächenspannung des Mediums aufgrund seiner Emulgierkraft.

Es schafft auch eine feindliche Umgebung, die eine übertriebene Zellvermehrung hemmt und das Wachstum von Hyphen stimuliert, wodurch auch die Produktion von Chlamydosporen begünstigt wird. Letztere betrachteten Widerstandsstrukturen. Diese Struktur hilft bei der Identifizierung der Candida albicans-Arten.

Glucose in diesem Medium erhöht seinerseits die Pigmentbildungskapazität einiger Pilze.

Es ist zu beachten, dass das Maismehlmedium mit Glucose für den Nachweis von Chlamydosporen im Candida albicans-Komplex nicht geeignet ist.

Vorbereitung

Hausgemachte Maismehl-Agar-Zubereitung

47 g gelbes Maismehl abwiegen und in 500 ml destilliertem Wasser auflösen. Auf 60 ºC erhitzen, dabei die Zubereitung etwa 1 Stunde lang umrühren. Filtern Sie dann durch ein Stück Gaze und Baumwolle. Optional kann es erneut gefiltert werden, indem Sie das Präparat durch ein Whatman Nr. 2-Filterpapier führen.

Das Volumen mit destilliertem Wasser auf 1000 ml auffüllen. 17 g Agar-Agar hinzufügen und bis zur Auflösung erhitzen. 15 Minuten bei 121 ºC autoklavieren.

In sterilen Petrischalen servieren. Im Kühlschrank lagern.

Die Farbe des vorbereiteten Mediums ist weißlich mit einem klumpigen Aussehen.

Wenn Sie Maismehl mit Glukose zu der oben beschriebenen Zubereitung zubereiten möchten, fügen Sie 10 g Glukose hinzu.

Kommerzieller Maismehlagar

17 g des dehydrierten Mediums werden gewogen und in 1 Liter destilliertem Wasser gelöst. Die Mischung kann unter leichtem Schütteln erhitzt werden, um sich vollständig aufzulösen. Sterilisieren Sie in einem Autoklaven bei 121 ºC bei 15 lb für 15 Minuten.

In sterile Petrischalen gießen. Erstarren lassen. Umdrehen und bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahren. Vor Gebrauch temperieren.

Der pH-Wert sollte bei 25 ºC 6,0 ± 0,2 betragen.

Maismehlagar mit Tween 80

Um der ISO 18416 zu entsprechen, muss Maismehlagar wie folgt hergestellt werden:

Wiegen Sie 65 Gramm pro Liter und geben Sie 10 ml Tween 80 hinzu. Erhitzen und kochen Sie einige Minuten, bis sich alles aufgelöst hat. Achten Sie dabei darauf, dass Sie nicht zu stark überhitzen. 15 Minuten bei 121 ºC sterilisieren.

Maismehlagar mit Glukose

Um die chromogene Kraft von Trichophyton rubrum-Kolonien zu verbessern und sie von T. mentagrophytes zu unterscheiden, kann der ursprünglichen Formel 0,2% Glucose zugesetzt werden. Tween 80 ist nicht erforderlich, da Glukose die Bildung von Chlamydosporen hemmt.

Verwenden

Die Verwendung von Maismehlagar ist hauptsächlich für die Untersuchung von Candida-Stämmen vorgesehen, um deren Identifizierung durch die charakteristische Beobachtung von Chlamydosporen bei Albicans-Arten zu erleichtern. Das heißt, die Verwendung dieses Agars dient als Hilfsmethode zur Identifizierung dieser Hefen.

Auf diesem Agar können sich sowohl saprophytische als auch pathogene Spezies entwickeln, die jedoch jeweils charakteristische Myzelstrukturen bilden. Beispielsweise produzieren Arten der Gattung Torulopsis kein Myzel und vermehren sich nur durch Blastokonidien.

Ebenso produzieren Trichosporon- und Geotrichum-Arten Arthrokonidien auf Maismehlagar, und es ist manchmal schwierig, zwischen den beiden zu unterscheiden.

Arthrokonidien der Gattung Geotrichum erzeugen eine Erweiterung der Hyphen, die einem Hockeyschläger ähnelt.

Auch die Herstellung von Pigmenten unter Verwendung von mit Glucose ergänztem Maismehlagar ist bei der Identifizierung von Trichophytom rubrum nützlich.

Gesät

Verdächtige Candida-Kolonien, die im primären Kulturmedium - Sabouraud-Agar - aus klinischen Proben, Kosmetika und Böden gewonnen wurden, werden unter anderem auf Maismehlagar subkultiviert. Das Medium wird ausgesät und 24 bis 48 Stunden bei 22 ° C inkubiert. Die Inkubationszeit kann bei Bedarf verlängert werden.

Chlamydospore Demonstration

Zu diesem Zweck muss der Maismehlagar mit Tween 80 mit der Dalmau-Technik beimpft werden. Diese Methode besteht darin, einen Teil der vermuteten Kolonie mit dem Platingriff zu nehmen und drei parallele Schnitte in der Mitte durchzuführen, wobei der Griff bei 45 ° gehalten wird. Die Schnitte sollten einen Abstand von 1 cm voneinander haben.

Anschließend wird ein zuvor geflammtes Deckobjekt auf die gesäten Streifen gelegt, so dass die Hälfte bedeckt und die andere freigelegt wird.

Inkubieren Sie die ausgesäten Platten 48-72 Stunden bei 30 ° C und untersuchen Sie sie dann unter dem Mikroskop durch das Deckglas.

Erhaltung von Pilzstämmen

Zur Aufrechterhaltung der Stämme werden die ausgesäten und gewachsenen Platten im Kühlschrank (4 bis 8 ° C) aufbewahrt. Auf diese Weise können sie mehrere Wochen dauern und für Lehr- oder Forschungszwecke verwendet werden.

QA

Für die Sterilitätskontrolle wird eine Platte ohne Inokulation bei Raumtemperatur inkubiert, es wird erwartet, dass es kein Wachstum oder keine Farbänderung gibt.

Zur Qualitätskontrolle können bekannte Stämme ausgesät werden, wie: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Die erwarteten Ergebnisse sind eine teilweise Hemmung von S. aureus und E. coli. Während für die übrigen Stämme ein zufriedenstellendes Wachstum erwartet wird.

Aspergillus niger wächst mit schwarzen und sporulierten Kolonien in einer ungefähren Inkubationszeit von 5 Tagen.

Candida albicans-Hefekolonien mit Chlamydosporenproduktion.

Saccharomyces cerevisiae produzieren große Hefezellen.

Einschränkungen

Am Boden der Platte bildet sich ein gelber Niederschlag, der nicht mit Kolonien verwechselt werden darf.

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