GALLEN-ESCULIN-AGAR: BEGRÜNDUNG, VORBEREITUNG UND VERWENDUNG - BIOLOGIE - 2025

Die Galle esculin Agar ist ein selektives Differenzierungsmedium Festkultur. Es wird als diagnostischer Test verwendet, um die Fähigkeit eines bestimmten Mikroorganismus zu bestimmen, in einem Medium zu wachsen, das Galle enthält, und um das Glucosid Esculin in Esculetin und Glucose zu zerlegen.

Dieser diagnostische Test wird verwendet, um Arten der Gattung Streptococcus der Gruppe D (Gallen-Esculin-positiv) von anderen Streptococcus-Gruppen zu unterscheiden, die negativ auf diesen Test reagieren.

Gallen-Esculin-Agarplatte, ausgesät mit einem Enterococcus-Stamm (Test positiv). Quelle: Kein maschinenlesbarer Autor angegeben. Philippinjl vermutet (basierend auf urheberrechtlichen Ansprüchen).

Es sollte beachtet werden, dass einige Streptokokken der Viridans-Gruppe Esculin hydrolysieren können, jedoch nicht in der Lage sind, in Gegenwart von Galle in einer Konzentration von 40% zu wachsen, weshalb in diesem Medium die Reaktion für diese Gruppe negativ ist.

Andererseits ist das Gallen-Esculin-Medium auch zur Diagnose von Listeria monocytogenes- oder Aerococcus sp-Spezies nützlich, da diese Mikroorganismen Gallen-Esculin-positiv sind.

Esculin Bile Agar besteht aus Pepton, Fleischextrakt, Ochsengalle, Esculin, Eisencitrat, Agar und destilliertem Wasser. Einige Handelshäuser enthalten Natriumazid in der Zusammensetzung des Mediums.

Das Medium kann im Labor hergestellt werden, wenn Sie alle Verbindungen separat haben, oder es kann aus dem handelsüblichen dehydrierten Medium hergestellt werden.

Basis

Das Gallen-Esculin-Medium enthält Peptonen und Fleischextrakt, beide Verbindungen liefern die notwendigen Nährstoffe für das Wachstum von Mikroorganismen.

Es enthält auch Esculin; Diese Verbindung ist ein Glucosid, das durch Vereinigung eines einfachen Monosaccharids (Glucose) mit einer Verbindung namens 6,7-Dihydroxycumarin oder Esculetin (Aglucon) gebildet wird, die durch eine Acetal- oder Glucosidbindung verbunden ist.

Der Test basiert auf dem Nachweis, ob das Bakterium Esculin hydrolysieren kann. In diesem Fall zerfällt das Esculin in Esculetin und Glucose. Esculetina reagiert mit dem im Medium vorhandenen Eisen und bildet eine dunkelbraune, fast schwarze Verbindung.

Dies bedeutet, dass das Eisen (III) -citrat als Reaktionsentwickler wirkt. Diese Eigenschaft macht Bile Esculin Agar zu einem Differenzialmedium.

Galle ist ihrerseits ein Inhibitor, der das Wachstum einiger Mikroorganismen verhindert. Daher muss das Bakterium vor der Spaltung des Esculins in der Lage sein, in Gegenwart von Galle zu wachsen. Daher wird dieses Medium als selektiv angesehen.

Die Bakterien, die sich in dieser Umgebung entwickeln können, sind hauptsächlich diejenigen, die in der Darmumgebung leben.

In diesem Sinne fügen einige kommerzielle Unternehmen dem Medium Natriumazid hinzu, um das Wachstum von enterischen gramnegativen Bazillen weiter zu hemmen und die Selektivität des Mediums für das Wachstum von Streptococcus zu erhöhen.

Schließlich verleiht der Agar dem Medium die feste Konsistenz und Wasser ist das Lösungsmittel der Verbindungen.

Vorbereitung

Hausgemachte Zubereitung von Gallen-Esculin-Agar

Wiegen:

5 g Peptonen

3 g Fleischextrakt

40 g Rindergalle

1 g Esculin

0,5 g Eisencitrat

15 g Agar

1000 ml destilliertes Wasser

Bei Zugabe von Natriumazid werden 0,25 g / Liter gewogen und zu der Mischung gegeben.

Lösen Sie die Komponenten in einem Liter destilliertem Wasser und erhitzen Sie sie, bis sich die Verbindungen vollständig aufgelöst haben. 5 ml in Reagenzgläser mit 16 x 125 mm Schraubverschluss verteilen. Autoklav bei 121 ° C, 15 Pfund Druck für 15 Minuten.

Aus dem Autoklaven nehmen und die Röhrchen auf einen Träger kippen, damit sich der Agar in einem breiten Flötenschnabel verfestigt.

Bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahren. Vor der Aussaat auf Raumtemperatur bringen.

Es können auch Gallen-Esculin-Agarplatten hergestellt werden; In diesem Fall wird die gesamte Mischung in einem Kolben autoklaviert und anschließend in sterilen Petrischalen verteilt. Lassen Sie sie erstarren und im Kühlschrank aufbewahren.

Der pH-Wert des Mediums muss 6,6 ± 0,2 betragen.

Herstellung von Gallen-Esculin-Agar aus einem kommerziellen Medium

Wiegen Sie die in der Beilage angegebene Menge. Dies kann von Geschäftshaus zu Geschäftshaus variieren. Gehen Sie anschließend wie oben beschrieben vor.

Der pH-Wert des Mediums sollte 6,6 ± 0,2 betragen. Die Farbe des dehydrierten Mediums ist hellbeige und das vorbereitete Medium ist dunkler Bernstein.

Kommerzielles Gallen-Esculin-Medium. Quelle: Foto des Autors MSc. Marielsa Gil.

Anwendungen

Das Gallen-Esculin-Medium wird hauptsächlich verwendet, um Streptokokken der Gruppe D (Gallen-Esculin-positiv) von den übrigen Streptokokken-Gruppen (Gallen-Esculin-negativ) zu unterscheiden.

Durch Kombination des Hypersalzbrühe-Wachstumstests mit dem Gallen-Esculin-Test kann eine spezielle Gruppe von Streptokokken der Gruppe D namens Enterococcus identifiziert werden.

Diese spezielle Gruppe von Streptokokken gehört zur Gruppe D der oben genannten Gattung und ist in der Lage, Esculin in Gegenwart von Galle zu hydrolysieren, ebenso wie die übrigen Mitglieder der Gruppe D, aber sie können sich auch in einem hypersalzten Medium (BHI mit Chlorid von) entwickeln 6,5% Natrium), eine Eigenschaft, die den Unterschied macht.

Daher werden Streptokokken, die Esculin-Galle hydrolysieren, aber nicht in hypersalzter Brühe wachsen, als Nicht-Enterokokken-Streptokokken der Gruppe D bezeichnet.

Gesät

Inokulieren Sie das Medium vorzugsweise aus einer reinen 24-Stunden-Brühe von Todd-Hewitt.

2 Tropfen mit einer Pasteurpipette auf die Oberfläche des Mediums geben und mit einer Platinschleife im Medium verteilen.

48 Stunden bei 35 ° C inkubieren, während die Inkubationszeit eingehalten wird, kann überwacht werden, ob eine positive Reaktion vorliegt. Wenn die Reaktion am Ende der Zeit negativ bleibt, kann sie bis zu 72 Stunden inkubiert werden.

Deutung

Positive Reaktion : Auftreten einer dunkelbraunen, fast schwarzen Farbe im Flötenschnabel (im Fall des Röhrentests) oder Schwärzung des Agars um die Kolonien (im Fall des Plattentests).

Negative Reaktion : Nach 72-stündiger Inkubation tritt keine Schwärzung des Mediums auf oder es tritt in weniger als der Hälfte des Röhrchens ein schwarzes Aussehen auf. Andererseits sollte das Bakterienwachstum im Medium ohne das Auftreten der schwarzen Farbe als negativer Test angesehen werden.

QA

Um die Qualität des Mediums zu bewerten, muss ein Enterococcus faecalis ATCC 29212-Stamm als positive Kontrolle und ein Streptococcus-Stamm, der nicht zur Gruppe D gehört, als negative Kontrolle verfügbar sein.

Einschränkungen

-Medien, die kein Natriumazid enthalten, ermöglichen das Wachstum von enterischen gramnegativen Bazillen. Einige von ihnen können die Mitte schwärzen.

- Einige Handelshäuser fügen eine geringe Konzentration an Galle hinzu (10%), und aus diesem Grund können sich einige Streptokokken, die nicht zur Gruppe D gehören, im Medium entwickeln und Esculin hydrolysieren, was zu Interpretationsfehlern führen kann.

Verweise

1. Koneman E., Allen S., Janda W., Schreckenberger P., Winn W. (2004). Mikrobiologische Diagnose. 5. Aufl. Editorial Panamericana SA Argentinien.
2. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiologische Diagnose. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentinien.
3. Mac Faddin J. (2003). Biochemische Tests zur Identifizierung von Bakterien von klinischer Bedeutung. 3rd ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentinien.
4. Lab. Britannia. Esculin Galle mit Azid-Agar. 2015. Verfügbar unter: britanialab.com
5. "Galle Esculin Agar." Wikipedia, die freie Enzyklopädie. 22. August 2017, 17:30 UTC. 22. April 2019, 17:35 Uhr. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Galle Esculin Agar Slants. 2015. Verfügbar unter: bd.com
7. Neogen Laboratories. Gallen-Esculin-Agar. Verfügbar unter: Foodsafety.neogen.com